Информация

Учебник/лабораторен наръчник за клетъчна култура на бозайници

Учебник/лабораторен наръчник за клетъчна култура на бозайници


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

За общи техники, включващи молекулярна биология, знам за молекулярното клониране на Самбрук и Маниатис, което обхваща много от стандартните техники за клониране.

Въпреки това, клетъчната култура на бозайници има много значителни разлики от бактериалната клетъчна култура, някои от които включват множеството различни варианти на среди за клетъчни култури, както и относително сложните системи, които не могат да бъдат предоставени с помощта на стандартизирана среда като LB или TB в културата на E. coli .

Има ли подобни учебници/лабораторни ръководства за клетъчна култура? Като алтернатива, добри рецензионни документи, обхващащи различните видове среди, използвани в клетъчната култура на бозайници, и техните относителни ползи също биха били добър отговор на този въпрос.


Култура на животински клетки: Наръчник за основна техника и специализирани приложения от Ian Freshney е най -популярната книга по темата за културата на животинските клетки.

Можете също така да се обърнете към Ръководството за култура на животински клетки на ATCC, което също съдържа информация за медийните формулировки.


Инженеринг на клетъчна култура: Производство на рекомбинантни протеини

В Cell Culture Engineering: Recombinant Protein Production, редакторите Gyun Min Lee и Helene Faustrup Kildegaard събират автори от най-висок клас, за да представят експертно покритие на теми като: развитие на клетъчна линия за терапевтично производство на протеини, развитие на преходна генна експресия на платформата и синтетична биология на CHO. Те предоставят на читателите всичко, което трябва да знаят за подобряването на характеристиките на продукта и биопроцеса, използвайки модели с мащаб на генома на данни за омика на метаболизма на CHO и биотехнологична култура на бозайници и много други.

Тази изцяло нова, актуална справка обхваща всички важни аспекти на инженерството на клетъчната култура, включително клетъчното инженерство, подходите на системната биология и технологията за обработка. Той описва предизвикателствата в развитието на клетъчната линия и клетъчното инженерство, напр. чрез инструменти за редактиране на гени като CRISPR/Cas9 и с цел да се проектират модели на гликозилиране. Освен това, той дава преглед на подходите за синтетична биология, прилагани към инженерството на клетъчната култура, и разработва използването на СНО клетки като обща клетъчна линия за производство на протеини. В допълнение, книгата обсъжда най-важните аспекти на производствените процеси, включително среди за клетъчна култура, партидни, захранвани партиди и перфузионни процеси, както и технология за анализиране на процеса, модели по качество и намаляване на моделите.


-Обхваща ключови елементи от инженерството на клетъчната култура, прилагани за производството на рекомбинантни протеини за терапевтична употреба
-Фокусира се върху клетките на бозайници и животни, за да подпомогне подчертаването на синтетичните и системни биологични подходи към инженерството на клетъчната култура, илюстрирано от широко използваната CHO клетъчна линия
-Част от известната поредица от книги "Разширена биотехнология"

Инженерство на клетъчните култури: Производството на рекомбинантен протеин ще се хареса на биотехнолози, биоинженери, учени по живот, инженери по химия и докторанти в областта на науките за живота.

Биография на автора

Гюн Мин Лий, д-р, е професор в катедрата по биологични науки в KAIST, Южна Корея, и оглавява лабораторията за инженерство на животински клетки. Освен това е научен директор в Центъра за биоустойчивост на фондация Novo Nordisk към Техническия университет на Дания.

Д-р Хелен Фауструп Килдегаард е старши изследовател и сътрудник по научни изследвания в секция Инженеринг и дизайн на клетъчни линии CHO в Центъра за биоустойчивост на Ново Нордиск към Техническия университет в Дания (DTU).


Допълнителни файлове

Интегрирана лаборатория за клетъчна култура върху чип: модулни микроустройства за култивиране на клетки от бозайници и доставка в микрофлуидни микрокапчици

Ако не сте автор на тази статия и искате да възпроизведете материал от нея в публикация на трета страна, която не е RSC, трябва официално да поискате разрешение, като използвате Центъра за защита на авторските права. Отидете на нашата страница с инструкции за използване на Центъра за изчистване на авторски права за подробности.

Авторите, допринасящи за публикации на RSC (статии от списания, книги или глави от книги), не е необходимо официално да искат разрешение за възпроизвеждане на материали, съдържащи се в тази статия, при условие че правилното потвърждение е дадено с репродуцирания материал.

Възпроизведеният материал трябва да бъде приписан, както следва:

  • За възпроизвеждане на материал от NJC:
    Възпроизведено от Ref. XX с разрешение от Националния център за научни изследвания (CNRS) и Кралското химическо дружество.
  • За възпроизвеждане на материал от PCCP:
    Възпроизведено от Ref. XX с разрешение от дружествата на собствениците на PCCP.
  • За възпроизвеждане на материал от PPS:
    Възпроизведено от Ref. XX с разрешение от Европейското дружество по фотобиология, Европейската асоциация по фотохимия и Кралското общество по химия.
  • За възпроизвеждане на материали от всички други списания и книги на RSC:
    Възпроизведено от Ref. XX с разрешение от Кралското химическо дружество.

Ако материалът е адаптиран, вместо възпроизведен от оригиналната публикация на RSC, „Възпроизведено от“ може да бъде заменено с „Адаптирано от“.

Във всички случаи Реф. XX е XX -та справка в списъка с препратки.

Ако сте автор на тази статия, не е необходимо официално да изисквате разрешение за възпроизвеждане на фигури, диаграми и т.н., съдържащи се в тази статия в публикации на трети страни или в теза или дисертация, при условие че правилното потвърждение е дадено с възпроизвеждания материал.

Възпроизведеният материал трябва да бъде приписан, както следва:

  • За възпроизвеждане на материал от NJC:
    [Оригинално цитиране] - Възпроизвежда се с разрешение на Кралското химическо дружество (RSC) от името на Националния център за научни изследвания (CNRS) и RSC
  • За възпроизвеждане на материал от PCCP:
    [Оригинален цитат] - Възпроизведено с разрешение на Обществата на собствениците на PCCP
  • За възпроизвеждане на материал от PPS:
    [Оригинален цитат] - Възпроизведено с разрешение на Кралското химическо дружество (RSC) от името на Европейското дружество по фотобиология, Европейската асоциация по фотохимия и RSC
  • За възпроизвеждане на материали от всички други списания на RSC:
    [Оригинален цитат] - Възпроизведено с разрешение на Кралското химическо дружество

Ако сте автор на тази статия, все още трябва да получите разрешение за възпроизвеждане на цялата статия в публикация на трета страна, с изключение на възпроизвеждането на цялата статия в дипломна работа или дисертация.

Информация за възпроизвеждане на материали от статии на RSC с различни лицензи е достъпна на нашата страница Заявки за разрешение.


Глава 48: Биореактори на клетъчна култура: Контроли, измервания и умален модел

Тази глава описва видовете биореактори, контролите на биореакторите за параметрите на процеса, измерването на клетъчния растеж и метаболитите и модела за намаляване на размера, използващ малки и пилотни съдове за култура, използвани в биофармацевтичната промишленост. Основните видове биореактори, използвани за процеси на клетъчни култури в биофармацевтичната индустрия днес, са биореактори с разбъркване и въздушен транспорт. Напоследък биореактори за еднократна употреба се използват за тяхно удобство. Всеки тип биореактор може да се използва за периодични, захранвани партиди и непрекъснати култури. Метаболити като глюкоза, глутамин, лактат, амоняк и аминокиселини могат да бъдат наблюдавани с предимство на измервания в реално време без вземане на проби за in situ анализ на културни метаболити, за да се поддържат предварително определени граници на всеки метаболит в захранваната партидна култура. Сондите in situ ще бъдат широко използвани в бъдеще поради лекотата на измерванията в реално време и липсата на вземане на проби. Големи промени в нивата на метаболитите се наблюдават при лактат и амоняк, които се считат за странични продукти от културата, в допълнение към промените в концентрациите на глюкоза, глутамин и аминокиселини. Правилният контрол на параметрите на процеса като рН, разтворен кислород (DO), разбъркване и аерация е най -важното съображение при работата на биореакторите за последователно производство на добър клетъчен растеж, производителност и качество на продукта. Умаленият модел се прилага и към приложенията за качество по проект за разработване на пространство за проектиране на параметрите на процеса, за да се гарантира предварително определено качество на продукта.


Избягване на микробно замърсяване

Потенциалните източници на замърсяване включват други клетъчни линии, лабораторни условия и персонал, слабо обучен в основни области, като асептични техники и добра лабораторна практика. По този начин използването само на клетки и реактиви с известен произход и качество не е достатъчно, за да се гарантира качеството на продукта (клетъчен материал или културни продукти), необходимо е да се демонстрира качество през целия производствен процес, а също и в крайния продукт. Рутинният скрининг подпомага ранното откриване на замърсяване, тъй като всички манипулации са потенциален източник на замърсяване.

Трите основни типа микробни замърсители в тъканната култура са:

Бактериално и гъбично замърсяване

Бактериалното замърсяване обикновено е видимо с невъоръжено око и се открива при внезапно увеличаване на мътността и промяна на цвета на хранителната среда в резултат на промяна в рН. Клетъчната култура може да оцелее за кратко, но клетките в крайна сметка ще умрат. Ежедневното микроскопско наблюдение на културите ще осигури ранно откриване на замърсяването и ще даде възможност за предприемане на подходящи действия веднага щом се появят първите признаци на замърсяване. Освен това трябва да се използват специфични тестове за откриване на бактерии и гъбички като част от рутинна и редовна процедура за скрининг за контрол на качеството.

Замърсяване с микоплазма

Микоплазмите са най-малките свободно живеещи самовъзпроизвеждащи се прокариоти. Липсва им клетъчна стена и способността да я синтезират. Те са с диаметър 0,3 μm и могат да се наблюдават като нишковидни или кокови форми. Има 6 основни вида, които са замърсители на тъканни култури, а именно M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. fermentans, M.hominis и Acholeplasma laidlawii.

Ефектите от микоплазмената инфекция са по-коварни от тези на бактериите и гъбичките, предизвиквайки няколко дългосрочни ефекта в клетъчните култури. Те могат да включват:

  • Променен темп на растеж
  • Морфологични промени
  • Хромозомни аберации
  • Промени в метаболизма на аминокиселини и нуклеинови киселини

Въпреки тези добре документирани ефекти, наличието на микоплазма често не се тества, вследствие на което в такива лаборатории по -голямата част от клетъчните линии са положителни за микоплазмата. Замърсяването с микоплазма е трудно да се открие, което изисква използването на специализирани техники. В миналото само специализирани лаборатории, като колекции от култури, са извършвали тези тестове. Въпреки това, сега се предлагат различни търговски комплекти за откриване на микоплазма, въпреки че характеристиките на тези комплекти могат да бъдат изключително променливи. Комбинация от тях трябва да се използва като част от рутинна и редовна процедура за проверка на качеството. ECACC рутинно тества култури за наличие на микоплазма и предлага услуга за тестване на микоплазма.

Някои клетъчни линии съдържат ендогенни вируси и отделят вирусни частици или експресират вирусни антигени на повърхността си, напр. Трансформирани линии с вирус на Epstein-Barr (EBV). Тези клетъчни линии не се считат за замърсени. Въпреки това, серумът от едър рогат добитък е потенциален източник на замърсяване с вируса на говежа вирусна диария (BVDV) и използването на заразен серум ще доведе до замърсяване на клетъчните линии с вируса. Замърсяването на клетъчните линии с BVDV може да причини леки промени в скоростта на растеж, но тъй като този вирус не е цитопатичен, макроскопските и микроскопичните промени в културата няма да бъдат открити. Доставчиците на говежди серум са наясно с това и съответно обикновено серумните серуми се продават като BVDV тествани. Като каза това, трябва винаги да проверявате внимателно, за да сте сигурни, че разбирате резултатите от всяко изследване, което се извършва върху серум. Серумът посочен ли е като BVDV тестван и никой не е открит? Каква е чувствителността на откриване? Тестваният за BVDV серум не е непременно свободен от BVDV.


Въведение в клетъчната култура

Клетъчната култура е растеж на клетки от животно или растение в изкуствена, контролирана среда. Клетките се отстраняват или директно от организма и се дезагрегират преди култивирането, или от клетъчна линия или клетъчен щам, който е установен преди това.

Някои условия на култивиране зависят от типа клетка, но всяка култура трябва да се състои от подходящ съд със субстрат или среда, която доставя хранителните вещества (като аминокиселини, въглехидрати, витамини, минерали), растежни фактори или основни хормони за култивиране на клетки. Газовете (O2, CO2), физико -химичната среда (рН, осмотично налягане, температура) също играят важна роля за регулиране на правилния растеж на клетките в изкуствена среда.

Приложения за клетъчни култури

Това е основен последователен и възпроизводим инструмент в молекулярната и клетъчната биология.

Помага за изучаване на нормалната клетъчна хомеостаза, клетъчната биохимия, метаболизма, мутагенезата, болестите и сложните ефекти.

Представлява моделна система за заболявания и скрининг на лекарства.

Основно оборудване за клетъчна култура

Специфичното оборудване на лаборатория за клетъчна култура зависи от вида на проведеното изследване, но всички лаборатории за клетъчна култура имат една и съща обща цел: да бъдат свободни от патогенни микроорганизми.

Разширеният списък по-долу съответства на оборудването и консумативите за повечето лаборатории за клетъчни култури, което позволява работата да бъде по-ефективна и точна.

- 70% етанол антисептик - Клетъчен инкубатор
- Аспираторна помпа - Центрофуга
- Автоклав - Фризер
- Брояч на клетките - Ръкавици
- колби за клетъчна култура - Среди, серуми, добавки за клетъчна среда
- Петри ястия от клетъчна култура - Пипети с различен капацитет
- Епруветки от клетъчна култура с различни размери - Серологичен пипетор
- Качулка за клетъчна култура - Стерилни филтри
- Микроямкови плаки за клетъчни култури - Контейнер за отпадъци

*Моля, обърнете внимание: Специфичното оборудване за клетъчна култура зависи от типа клетка и целта на изследването

Безопасност на клетъчната култура

Работата в лаборатория за клетъчна култура е свързана с различни рискови фактори и опасности като токсини или мутагенни реактиви. Човешкият/животинският материал може да съдържа вируси и други опасни биологични агенти. Ето защо, докато манипулирате човешки/животински материал, е важно да следвате общите насоки за безопасност за лабораторните практики.

1. Измийте ръцете си при влизане и преди излизане от лабораторията.

2. Носете защитни дрехи (ръкавици, затворени обувки, лабораторно палто).

3. Не яжте, не пийте, не пушете.

4. Липса или ниско образуване на аерозол.

5. Деконтаминирайте всички повърхности преди и след експеримента.

6. Работете в съответствие с указанията на съоръжението.

7. Изхвърлете всички отпадъци по подходящ начин.

8. Ограничен достъп само до оторизиран персонал.

9. Избягвайте използването на остри предмети.

10. Винаги маркирайте ясно всички проби.

11. Докладвайте всички инциденти на служителя по безопасността.

Асептични техники, необходими при работа с клетъчна култура

За да бъдете успешни в клетъчната култура, от съществено значение е да останете среда без замърсяване (бактерии, гъбички и т.н.) Аспетичните техники гарантират, че никакви микроорганизми не влизат в клетъчната култура. Стерилността на клетъчната култура се осигурява чрез набор от процедури.

Асептични техники, необходими при работа с клетъчна култура.

Манипулиране Реагенти/Среда работно място
Бавно/внимателно боравене. Предварителна стерилизация на всички реактиви/оборудване Качулката на клетъчната култура работи правилно
Стерилизация на всички артикули преди започване. Няма замърсяване в реагентите (срок на годност, нормален външен вид). Често обеззаразяване (аспиратор, хладилник и др.)
Стерилни пипети Работна зона: стерилна и подредена
Без докосване на стерилни предмети до нестерилизирани повърхности

Околна среда на клетъчната култура

Клетъчната култура е невероятен инструмент, който позволява лесен контрол и манипулиране на всички физикохимични и физиологични клетъчни фактори, като температура, осмотично налягане, pH, газ, хормони и хранителни вещества.

Околна среда на клетъчната култура.

Медиите рН Температура CO2
Съдържа хранителни вещества, растежни фактори и хормони Средното рН за клетките на млекопитаещите е рН 7,4 Зависи от телесната температура на гостоприемника Контролиран от медиите
Серумен източник на растеж, типиди, хормони Клетъчни линии на бозайници 36-37°C Популярни са органични или C02 бикарбонатни буферни системи
Вмъкнете клетъчни линии 27-30 ° C Може да повлияе на pH
Най-често се среща 4-10% C02

Медийни добавки за клетъчна култура

Медийните добавки помагат за оптимизиране на клетъчния растеж за специфични приложения в зависимост от избраната тъкан или тип клетка. Предимствата на използването на хранителни добавки като растежни фактори или цитокини са, че те могат да подобрят клетъчната жизнеспособност и растеж и да поддържат клетките по -здрави за по -дълго време. Например, фибробластният растежен фактор (FGF) играе важна роля в различни биологични функции in vivo и in vitro и може да поддържа клетъчна култура през уикенда, тъй като Proteintech термостабилният FGF (HZ-1285) не изисква смяна на средата всеки ден.

Стабилността на FGFbasic-TS и основен FGF (получен от Е. coli) в свободна от ксенон, химически дефинирана среда за клетъчна култура при 37 ° С. Концентрацията на протеин се определя чрез ELISA всеки ден в продължение на 3 дни. След един ден на инкубация при 37˚C, FGF basic е неоткриваем, докато FGFbasic-TS присъства на нива от 60%, 35% и 20% от началната му концентрация на дни 1, 2 и 3.

Растежните фактори играят съществена роля за поддържане на растежа на културата in vitro. В зависимост от околната среда, определени клетки могат да доведат до различни видове клетки, специфични за линията. Вижте по -долу обобщение на ключовите фактори на растеж, необходими за нормалния клетъчен растеж, метаболизма, клетъчното развитие в културата и техния процес на диференциация.

Образуване и регенерация на костите.

Използва се като фактор за диференциация на плурипотентни стволови клетки и насърчава остеогенната диференциация на мезенхимни стволови клетки

Действа като митоген за много типове клетки, включително хепатоцити

Насърчаване на растежа и диференциацията на хематопоетичните прогениторни клетки.

Използва се за подпомагане на образуването на in vitrocolony на гранулоцит-макрофагите прогенитори.


Sartolab ® ️ Multistation – филтриране на клетъчна култура без ръце за малки обеми​

  • Изяснете културите на бозайници с висока плътност за минути
  • Решение от кутията
  • Бързо и без усилия

Лабораторните комплекти на Sartoclear Dynamics ® са проектирани за бързо събиране на 15 ml до 1 000 ml обеми клетъчни култури в лабораторията, което позволява да се извърши избистряне и стерилна филтрация в един етап. Тези комплекти опростяват процеса, като напълно премахват етапа на центрофугиране, който иначе е необходим за изясняване. В резултат на това до 1000 mL клетъчни култури могат ефективно да се избистрят и стерилизират за минути - бързо и лесно.

Лабораторни комплекти за филтриране на Sartoclear Dynamics ®

Sartoclear Dynamics Lab изяснява по-бързо и по-ефективно от другите процеси клетъчните култури на бозайници с висока плътност.
Гледайте това видео за сравнение.

Лабораторни V комплекти на Sartoclear Dynamics ®

Избистряне и стерилна филтрация на до 1 L клетъчна култура от бозайници, комбинираща филтърно помощно средство за избистряне и вакуумно филтриращо устройство за стерилно филтриране.

  • Стерилизирани торбички с филтърни помощни и вакуумни филтриращи устройства
  • 14 комплекта за покриване на диапазон от обеми проби до 1000 mL с клетъчна плътност до 20 x 10 6 клетки/mL

Sartolab ® Мултистанция за филтър за свободни ръце на малки обеми

За едновременна филтрация на до 6 x 50 ml проби без необходимост от инсталиране на допълнителни съединители и отнемащо време стабилизиране на филтърни блокове.

  • Филтрация без ръце
  • Един единствен източник на вакуум позволява едновременна филтрация на до 6 проби
  • Спестяване на време - няма време за инсталиране за всеки филтър преди употреба

Комплект Sartoclear Dynamics ® Lab P15

Удобният комплект, готов за употреба, съчетава 20 ml спринцовка, предварително напълнена с филтриращо средство за избистряне с 0,2 µm полиетерсулфонов филтър за стерилна филтрация.

Екипът на LifeArc, благотворителна организация за медицински изследвания със седалище в Обединеното кралство, използва Sartoclear Dynamics ® ️ Lab и Sartolab ® ️ Multistation за изясняване на носителите на клетъчни култури с висока плътност за минути, създавайки работен поток, който е по-ефективен и продуктивен.

„Обработката на течност от клетъчна култура на бозайници може да бъде особено предизвикателство, тъй като в лабораторията често сме водени от необходимостта да изпълняваме тази задача бързо с минимална загуба на количеството получена течност от клетъчна култура. Стандартната вакуумна филтрация не винаги е идеалното решение поради до ограничения в сложността на самото оборудване. Това често изисква допълнителен надзор и може да отнеме много време за извършване, особено когато са включени няколко проби.

Мултистанцията значително помогна на нашата лаборатория. В допълнение към капацитета от шест проби, независимо управляваният дизайн на няколко порта предоставя на операторите гъвкавостта да изпълняват допълнителни задачи паралелно, като по този начин осигурява по-голяма ефективност като цяло в лабораторията с подобрено събиране на течности от клетъчни култури. "


Учебник/лабораторен наръчник за клетъчна култура на бозайници - Биология

Офис: 208 Изследователски комплекс Биосистеми
Университет Клемсън
Клемсън, SC 29634

Доктор, Университет на Мериленд, College Park, 1993 г.,
Инженерна химия

MS, Държавен университет в Колорадо, Форт Колинс, 1988 г.,
Инженерна химия

BSE, Университетът на Мичиган, Ан Арбър, 1986 г.,
Инженерни науки - Биоинженеринг

Д -р Харкум завършва бакалавърска степен по инженерство и инженерство в Университета на Мичиган в Ан Арбър по инженерни науки - биоинженеринг. Завършила е химическо инженерство, получава магистърска степен от държавния университет в Колорадо и докторска степен от Университета на Мериленд в College Park. Работила е за Администрацията по храните и лекарствата в Центъра за биологични оценки и изследвания. По-конкретно, тя работи в отдела за моноклонални антитела в Службата за терапевтичен преглед и изследвания. Тя е била преподавател в катедрата по химическо инженерство и програма за молекулярна биология в Държавния университет в Ню Мексико от 1995-2002 г. Тя пристига в университета Клемсън през 2002 г. като доцент по химическо инженерство. Тя се прехвърля в рамките на Клемсън в катедрата по биоинженеринг през 2004 г.

Изследователските интереси на д -р Харкум се фокусират предимно около рекомбинантна ДНК, контрол на биореактора и генна експресия. Нейната лаборатория извършва авангардни изследвания по широк спектър от теми, вариращи от производство на етанол от лигноцелулозна биомаса до агрегация на протеини в клетки от яйчници на китайски хамстер до широкомащабно производство на стволови клетки до анализ на генната експресия на микроорганизми. Д-р Харкум е поканен на Петия годишен симпозиум на Националната инженерна академия по границите на инженерството, спечели награда NSF CAREER, награден е с Центъра за стипендии за селскостопански биотехнологии и Regent Fellowship и е представен в изданието на 1996-1997 г. Кой е кой в ​​науката и инженерството. " Д -р Харкум и нейните сътрудници по електротехника и компютърно инженерство (Матю Пепър, Ли Уанг, Аджай Падмакумар, д -р Тимоти К. Бург и д -р Ричард Е. Гроф) спечелиха 1 -во място в BlueCompetition 2013, спонсорирано от BlueSens на Германия.

В сътрудничество с Университета Джон Хопкинс, Университета в Делауеър и Университета в Масачузетс-Лоуъл, д-р Харкум и Университетът Клемсън получиха стипендия на NSF- Индустриален/Университетски кооперативен изследователски център (I/UCRC), озаглавена Разширеният център за иновации в областта на биопроизводството на бозайници (AMBIC). AMBIC е фокусиран върху намаляване на времето и разходите за култивиране на клетките, необходими за производството на биофармацевтици. Освен това д -р Харкум ръководи екипа в Клемсън като част от новосформирания Национален институт за иновации в производството на биофармацевтици (NIIMBL). NIIMBL се ръководи от Университета в Делауеър и е един от дванадесетте производствени института в САЩ. NIIMBL е фокусиран върху ускоряване на иновациите в производството на биофармацевтици на всички фази и обучение и обучение на водеща световна работна сила за производство на биофармацевтици. Изследователите на Clemson са много развълнувани да участват в тази важна инициатива.


Учебник/лабораторно ръководство за клетъчна култура на бозайници - Биология

Основната цел на клетъчната, тъканната и органната култура е да изолира на всяко ниво на организация частите от целия организъм за изследване в експериментално контролирана среда. Характерно за интактните организми е, че съществува висока степен на взаимовръзка и взаимодействие между съставните части. Култивирането in vitro поставя клетките извън въздействието на организма като цяло и на продуктите на всички клетки, различни от тези, въведени в културата. Изкуствените среди могат да бъдат проектирани да имитират естествената физиологична, или да се променят по желание чрез умишлено въвеждане на определени променливи и напрежения.

Почти всички видове клетки или агрегати от клетки могат да бъдат изследвани в културата. Живите клетки могат да бъдат изследвани чрез кинофотомикрография и чрез директна, фазово-контрастна, интерференционна, флуоресцентна или ултравиолетова микроскопия. Фиксираните клетки от култура са подходящи за цитологично, цитохимично, хистологично, хистохимично и електронно микроскопско изследване. Популации от клетки от монослоеве или суспензионни култури се използват за хранителна, биохимична и имунологична работа.

Органната култура, отглеждането на цели органи или части от тях, е особено подходяща за изследване на развитието, на индуктивни взаимодействия и на въздействието на химични и физични агенти върху физиологичните функции на определени органи.

Както клетъчната, така и органната култура имат приложение в патологията, напр. , за сравнителни, развитие и диагностични изследвания на тъкани от нормални и болни донори, за изследвания върху канцерогенезата, генетичните вариации на соматичните клетки, чувствителността към вируси и др. Клетъчните култури се използват широко в микробиологични изследвания, за изследване на ефектите на радиацията и за скрининг на лекарства, особено канцерогенни, мутагенни и радиомиметични агенти.

Клетъчното хранене обикновено е изключено от материала, избран за тази глава, тъй като тази тема е изцяло прегледана другаде (Waymouth, 1954, 1960, 1965). Изследователите, които ще бъдат посочени тук, са избрани, защото (1) допринасят значително за нашето разбиране за биологията на мишката, за разлика от наблюденията от общ интерес в клетъчната биология (напр. Използването на миши клетки за тестване или скрининг на лекарства) или канцерогени), (2) се отнасят до клетки, получени от инбредни щамове на мишки или от мутанти, или (3) предлагат приложение към такива клетки.

Тъканите са били култивирани за първи път преди началото на века и оттогава са създадени множество техники, всяка от които е предназначена за решаване на конкретен проблем. Основна информация за техническите процедури и техните многобройни приложения в биологията на бозайниците може да се намери в учебниците на Parker (1961), Paul (1961), White (1963) и Merchant et. al. (1964). Други прегледи включват тези, редактирани от Уайт (1957) и Стивънсън (1962), като редица особено подчертават клетъчното хранене от Стюарт и Кърк (1954), Уеймут (1954, 1960, 1965), Ханкс (1955), Бигърс и др. (1957), Geyer (1958), Morgan (1958), Swim (1959), Paul (1960) и един, занимаващ се основно с клетъчната биохимия от Levintow и Eagle (1961). Библиографията на изследванията в тъканната култура, 1884-1950 (Murray and Kopech, 1953) обхваща много пълно литературата от този период и предстои да бъдат публикувани ключове за статии в тъканната култура за годините 1961 нататък (Murray and Kopech, 1965 , 1966).

Въпреки че пилешкият ембрион е най -често използваният източник на материал за отглеждане в периода 1910 до 1940 г., тъканите на ембрионалната и възрастната мишка са спечелили благоприятно предимство от 1940 г., особено след въвеждането на антибиотици, които намаляват необходимостта от строго асептично лечение техники в някои видове експерименти. Обширното отглеждане на миши клетки дължи много на пионерската работа на Ърл, Евънс, Санфорд и техните колеги от Националния институт по рака. Сред основните приноси на тази група са подобряването и стандартизирането на техниките, включително методите за масово култивиране и храненето чрез химически определени среди, развитието на клетъчни линии и клонинги, сравнителното изследване на цитологичните и биохимичните свойства на отдавна установени клетки линии и изследване на злокачествена трансформация in vitro.

Всеки от основните типове клетки (фиброцити или механоцити, епителиоцити и амебоцити (Willmer, 1960 a, 1960 b)) има своите специални характеристики in vitro. Опитът показва, че е важно, когато се описват клетки, отгледани in vitro, да се посочат подробности за вида, възрастта и пола на източника на клетките, тъканта на произход и да се посочи дали те са нормални или неопластични. Клетките и тъканите, прясно изолирани от животното, се обозначават като "първични култури" (Fedoroff, 1966). "Първична клетъчна линия" се отнася до популация от клетки, получени чрез директно изолиране от животно и не е непременно способна на серийно размножаване за неопределено време. Установена клетъчна линия се отнася до популация от клетки, която е била серийно трансплантирана най-малко 60 пъти in vitro. Първичните или установените клетъчни линии или клетъчни щамове трябва да получат обозначения в съответствие с принципите, препоръчани от Международната среща по тъканни култури от 1957 г. (Anon., 1958 Paul, 1958 Fedoroff, 1966).

Приложения на клетъчна култура

Могат да бъдат цитирани само няколко представителни примера за използване на клетъчни култури в биологията на мишки.

Митотичният процес и неговата модификация от стимуланти или супресори са изследвани в много типове клетки (Fell and Hughes, 1949). Точен брой хромозоми, за да се установи степента на отклонение от диплоидията, е направен върху 10-дневни фетални миши клетки в културата от Hungerford (1955). Хромозомните комплементи на новородени и възрастни мишки могат да бъдат преброени, без да се убиват животните, в първични тъканни култури на върховете на опашката или фрагментите на ушите (Edwards, 1961). Митотичният цикъл е анализиран от Defendi и Manson (1963), актиномицин D -резистентни и чувствителни системи или синтез на РНК, идентифициран от Paul и Struthers (1963), и продължителността на синтетичния ДНК период на миши соматични клетки се оказа вероятно постоянна (Камерън, 1964).

Видимата светлина (Earle, 1928 a, 1928 b, 1928 c Fr éd éric, 1954) има някои инхибиращи ефекти върху живите клетки. Смъртоносните ефекти от X-облъчването могат да бъдат количествено определени върху миши клетки (Reid и Gifford, 1952), и ефектите на радиацията върху клетъчните съставки (Whitmore et al., 1958) и върху синтеза на ДНК и РНК (Whitfield и Rixon, 1959 Till , 1961 а ) могат да бъдат изследвани. Могат да се прилагат и методи за химическа защита на облъчени клетки (Whitfield et al., 1962). Рентгеново-индуцираните хромозомни аберации могат да бъдат анализирани (Chu и Monesi, 1960). Ултравиолетовата светлина, която инхибира клетъчното делене е щам L клетки, не влияе значително върху синтеза на ДНК (Whitfield et al., 1961). Преживяемостта на облъчените клетки може да бъде сравнена in vivo и in vitro, както е направено от McCulloch и Till (1962) за костен мозък на мишка, изложен на Co 60 γ-лъчи.

Диференциацията на клетъчно ниво е изследвана предимно в органи, а не в клетъчни култури. Въпреки това, Ginsburg (1963) е видял диференциацията на миши тимусни лимфоидни клетки в мастоцити, които могат да се произвеждат в голям брой и да се отглеждат в суспензия (Ginsburg and Sachs, 1963). Мускулната диференциация може да бъде проследена и в тъканна култура, а техниката на тъканна култура е приложена от Pearce (1963) за изследване на мускулната дистрофия.

Използването на тъканна култура при изследване на рака е прегледано от Мъри (1959). По-нова работа включва тази на Mitsutani et al. (1960) за развитието на почти диплоиден клетъчен щам от лейомиосаркома, предизвикан от кондензат на дим, в мъжка C3H мишка и тази на Fernandes и Koprowska (1963) върху клетъчни линии от нормална шийка на матката на C3H мишки и върху клетки от третирани матки за различен период от време с бензпирен.

Направено е сравнение на ензимните активности в клетките в културата с тези от мишка (напр. на β-галактозидаза от Maio и Rickenberg, 1960). Изчисленията на β-глюкуронидаза в клетъчни линии от C3H мишки (които имат по-ниска активност по отношение на този ензим от повечето инбредни щамове на мишки, особено в черния дроб) показват, че повечето клетъчни линии имат многократно по-висока активност от тези на миши черен дроб с най-висока активност (Kuff and Evans, 1961). От друга страна, клетъчните щамове на мишки след продължително култивиране in vitro изглежда равномерно имат много ниска каталазна активност в сравнение с прясно изолирана тъкан на мишка (Peppers et al., 1960). Дългосрочните култури на фибробласти изглежда претърпяват по-големи вариации в съдържанието на ензими, отколкото например чернодробните клетки. Westfall et al. (1958) установяват, че активността на аргиназата и роданеза в чернодробните клетъчни линии е висока, както в тъканта на произход, но че линиите на фибробластите варират значително в дейностите на един или и на двата ензима. Тази вариация може да е свързана с опита на Klein (1960, 1961), че индукцията на аргиназа зависи от други фактори освен от субстрата. В повечето случаи индуцирането на аргиназа изисква наличието на РНК, както и на аргиназа. Ензимните модели на установените клетъчни щамове са сред най -полезните черти за характеризиране на клетките в културата (Westfall, 1962 Conklin et al., 1962).

Стабилни и нестабилни характеристики на клетъчни култури

Клониране. В някои отношения клетките, култивирани in vitro, показват значителна стабилност, в други те претърпяват големи промени от родителските клетки. Клонирането — Процесът на извличане на популация от клетки от една клетка — позволи да се следват клетъчни линии с общ произход и даде много нови прозрения за потенциала на клетките и за обстоятелствата, при които те запазват или губят характеристики, получени от техните родители (Sanford et al., 1948 Hobbs et al., 1957 Sanford et al., 1961 b).

Вариации в клонингите. Многото клетъчни линии и клонинги, установени от C3H мишки от Sanford et al. (1961 д) обикновено претърпява морфологични, биохимични и хромозомни промени доста рано в историята на културата. Но след като бъдат установени, много от характеристиките са със забележителна стабилност и се запазват в продължение на много години на серийно отглеждане. Клон на сарком-продуциращи клетки (произхождащи от нормална C3H съединителна тъкан) поражда "високи" и "ниски" сарком-продуциращи линии (Sanford et al., 1954 Sanford et al., 1958) и подлинии от тях са характеризирани чрез много различни модели на хромозомен брой и характер (Chu et al., 1958), на няколко ензимни активности (Sanford, 1958 Westfall et al., 1958 Sanford et al., 1959 Scott et al., 1960 Peppers et al., 1960 Sanford et al., 1961 д) и с гликолитична активност (Woods et al., 1959).

Стабилни характеристики на клетъчните линии. Някои функции продължават да съществуват при много поколения трансплантации в културата. Те включват производството на меланин от миши меланом (Sanford et al., 1952) и на стероиди от тумор на надбъбречната жлеза (Sato and Buonassisi, 1961) и синтеза на 5-хидрокситирптамин, хистамин и хепарин от мастоцитите на мишката тумор Р-815 ( Dunn and Potter, 1957 Schindler et al., 1959 Green and Day, 1960 Day and Green, 1962). Полинуклеотидните последователности на ДНК, характерни за мишката, се задържат в L клетки след повече от 20 години in vitro, въпреки проявения много анормален кариотип (McCarthy and Hoyer, 1964).

Имунологични характеристики. Имунологичната специфичност се запазва за много дълги периоди на култивиране в хомоложна, хетероложна или химически дефинирана среда, особено специфичност на щама на мишки в тумори, култивирани in vitro. Имунологични методи са използвани за идентификация на видовете клетки в културата (Coombs et al., 1961 Coombs, 1962 Fedoroff, 1962 Brand and Syverton, 1962), за изследване на антигенни различия между клетъчните линии (Coriell et al., 1958 Kite и Merchant, 1961 McKenna и Blakemore, 1962), и за идентифициране на специфични антигени, като антиген за трансплантация на Н-2 (Manson et al., 1962 a, 1962 b Cann and Herzenberg, 1963 a, 1963 b).

Неопластични трансформации. Многократно се наблюдава, че клетките с нормален произход претърпяват злокачествена промяна след повече или по -малко продължително култивиране in vitro (Earle and Nettleship, 1943 Sanford et al., 1950 Evans et al., 1958 Sanford et al., 1961 d, 1961 д) . Неопластичната трансформация на клетки, произхождащи от нормални тъкани, и поддържането или загубата на капацитета за производство на тумори при трансплантация в подходящи гостоприемници са интригуващи проблеми, илюстриращи диапазона от способности на клетката. Много от тези трансформации са „спонтанни“ (т.е. необясними) (Earle and Nettleship, 1943 Sanford, 1958, 1962 Evans et al., 1958 Sanford et al., 1959 Shelton et al., 1963). Други са умишлено индуцирани от химически канцерогени (Earle, 1943 Earle et al., 1950 Sanford et al., 1950 Shelton and Earl, 1951 Berwald and Sachs, 1963) или от вируси (Dawe and Law, 1959 Dulbecco and Vogt, 1960 Vogt и Dulbecco, 1960 Sanford et al., 1961 c Sachs and Medina, 1961 Pearson, 1962).

Туморите запазват способността си да растат в хистосъвместими гостоприемници и като цяло не придобиват способността да преодоляват бариерите за хистосъвместимост, освен след като се съхраняват при -70°C (Morgan et al., 1956), въпреки че известна степен на имунологична несъвместимост може да се развие за дълго време. -крайни култури (Sanford et al., 1954, 1956).Клетъчните щамове, произхождащи от нормални клетки и придобиващи в рамките на една или две години способността да произвеждат тумори, могат да претърпят прогресивно намаляване на тумор-продуциращия капацитет след още няколко години in vitro (Earle et al., 1950). Клетките с намалена способност за производство на тумори могат обаче да растат при животни, които са получили рентгеново облъчване (Sanford et al., 1956). Щамът, например, след 10 години in vitro може да произведе тумори в 15 % от необлъчените и в 64 % от облъчените C3H гостоприемници. Това повдига въпроса дали прогресивната имунологична несъвместимост се дължи на промени в клетъчната линия или на промени в инбредния щам за периода от 10 или повече години след изолирането на клетката. След 13 години L клетките запазват своята C3H специфичност, тоест няма да растат в нито един от няколко други щама мишки. Разликите в "високите" и "ниските" линии, произвеждащи рак, и двете от които произвеждат известен имунитет при C3H мишки, и фактът, че "ниската" линия ще расте в облъчени C3H гостоприемници, доведоха до заключението (Sanford et al. ., 1958), че по-бързо растящата "висока" туморна линия може да установи тумор, преди да се развие резистентност в гостоприемника. Установено е, че клетъчни щамове и получени едноклетъчни клонове, установени в културата от C3H карциноми, носещи туморен агент на млечната жлеза, варират в устойчивостта на агента. В някои клетъчни щамове агентът е демонстриран след 6 до 12 месеца на бърза клетъчна пролиферация in vitro, в други агентът изчезва (Sanford et al., 1961 a).

Експериментален контрол на злокачествените промени. Правени са опити да се постави под експериментален контрол „спонтанната“ трансформация на нормални в злокачествени клетки. Evans et al. (1964) са проследили прогресивните промени в културите, инициирани от смлени ембриони на C3H, като тестват способността им да произвеждат тумори при вътреочна имплантация. Няма тумори в резултат на ограничен брой култури, отглеждани до 211 дни в химически дефинирана среда. Клетките, отгледани в среда, допълнена с 10% конски серум, са в състояние да произвеждат тумори от около 120 дни.

Barski и Cassigena (1963) имаха за цел да произвеждат паралелни злокачествени и немалигнирани клетъчни линии от възрастни женски бели дробове C57BL, аналогично на спонтанно получените паралелни C3H линии на Sanford et al. (1950), за използване в техните изследвания на клетъчна хибридизация (виж по -долу). Такива двойки линии са получени, едната от култура, често субкултивирана с помощта на трипсин, а другата от по-рядко пренасяна култура, субкултивирана чрез механична дисперсия и неизложена на трипсин. И двете линии рано станаха анеуплоидни (средният брой хромозоми в двете клетъчни линии при 10 -то преминаване на трипсинизираната линия и шестият пасаж на нетрипсинизираната линия беше 68). Трипсинизираната линия (PT) е силно злокачествена от 16 -ия пасаж (184 дни), докато нетрипсинизираната линия (PG) не е злокачествена до 37 -ия пасаж (436 дни). Необходими са допълнителни доказателства, за да се определи дали разликите в морфологията и злокачествеността са причинно свързани с лечението с трипсин. Тодаро и Грийн (1963) предполагат, че процесът на установяване на клетъчни линии може да изисква намаляване на "пропускливостта" на клетките до малки молекули, а третирането с трипсин увеличава "пропускливостта" (Phillips and Terryberry, 1957 Magee et al., 1958 ).

Саркоматозна промяна в карциномите. Тъканните култури са допринесли за изясняване на добре познатата "саркоматозна промяна", често наблюдавана при трансплантирани карциноми. В обширно проучване Sanford et al. (1961 d) изследват 18 различни клетъчни щама, получени от тумори на млечната жлеза C3H. По принцип туморите, поддържани в културата до 25 седмици, нарастват като диференцирани карциноми на млечната жлеза при ретрансплантация в мишки. Клетките, трансплантирани след това време, нарастват като тумори, подобни на саркома. Оказа се, че туморите, които са били пренесени при миши сериен пасаж, са морфологично по-стабилни от първичните тумори, поставени в култура. "Саркоматозната промяна" очевидно не беше единен процес. В някои случаи, при хепатоми, меланоми и тумори на щитовидната жлеза (Sanford et al., 1952), както и при тумори на гърдата, стромата може да претърпи злокачествена промяна. В други случаи самите карциномни клетки се променят морфологично и придобиват фибробластен вид. Обратната промяна (от типове фибробластични към епителиоидни клетки) е изследвана в злокачествен произход от Ludovici et al. (1962 a, 1962 b), които произвеждат значително по-голям (64 %) дял култури, показващи тази промяна чрез третиране със смес от трипсин-антибиотик, отколкото се наблюдава при контролите, които не са били така третирани (7 %).

Хромозомни вариации и соматична клетъчна генетика. Хранително-зависими и независими от хранителни вещества, устойчиви на лекарства и чувствителни към лекарства, радиационно устойчиви и чувствителни към радиация клонове (Hauschka, 1957 Fedoroff and Cook, 1959 Fisher, 1959 Hsu and Kellogg, 1959 Biesele et al., 1959 Roosa and Herzenberg , 1959 Hsu, 1961 Cann и Herzenberg, 1963 a, 1963 b) са сред инструментите, които правят възможно изследването на генетиката на популацията на клетки от бозайници и неопластични клетки (Merchant and Neel, 1962 Harris, 1964 Krooth, 1964).

Ротфелс и Паркър (1959) съобщават, което сега е доста често срещано преживяване, че прясно експлантираните тъкани (в техния случай от CF 1 мишки) първоначално растат бързо, след което преминават в дълъг (6 месеца или повече) период на оцеляване без растеж и накрая, в някои случаи, навлизат в нова фаза на пролиферация, от която могат да се установят клетъчни линии. Хромозомите на такива клетъчни линии обикновено са хетероплоидни и хетеротипни (т.е. съдържат хромозоми, които се различават значително от нормалните 40 телоцентрици на мишката). Бимодалните разпределения на хромозомите не са необичайни, както в случая с културата на Ротфелс и Паркър 23855-8 от CF 1 бъбрек, която съдържа приблизително равен брой клетки с съответно около 38 и 70 хромозоми, модел, който се е запазил в поне 14 субкултури (12 месеци). Hsu (1961) и Chu (1962) коментират бързото отклонение от диплоидията, наблюдавано дори в първичните култури с миши клетки, и сравняват това с по -голямата кариотипна стабилност на човек, плъх и много други бозайници. Todaro и Green (1963) разработиха установени клетъчни линии от трипсин-дезагрегирани миши ембриони от 17 до 19 дни, използвайки трипсин при всяко прехвърляне. Наблюдава се обичайният спад в темпа на растеж по време на ранните пасажи, но при 15 до 30 поколения in vitro темпът на растеж нараства. В началото на третата фаза, която при техните условия беше по -малка от 3 месеца, клетките, отговорни за повишаването на скоростта на растеж, бяха диплоидни, но те се изместиха (често бързо) към тетраплоидния диапазон. Маркерните хромозоми се появяват по -късно.

Дълго установените клетъчни щамове, като повечето ракови заболявания (които Hauschka (1958) описва като "мултиклонални мозайки от променени кариотипове"), имат характерни и идентифицируеми кариотипове, въпреки че в рамките на един щам може да има значителни вариации в броя и типовете хромозоми. Рядко е да се открие в култури от миши клетки, че хромозомите са всички или дори понякога преобладаващо, телоцентрични. Въпреки това, анализ на Levan и Hsu (1960) на NCTC 2940 — клетъчна линия, произхождаща от C3H карцином на млечната жлеза — след пренасяне за около 2 години in vitro, показва само телоцентрици в брой стволови линии = 84 хромозоми. Друга туморна клетъчна линия на млечната жлеза, NCTC 2777, с хипертетраплоиден номер (s = 73), съдържа само телоцентрици, с подчертано изключение на една голяма, причудлива и мултиформена хетерометацентрична хромозома.

Пет установени щама на миши клетки (три от тях подлинии на NCTC клон 929, щам L) бяха установени от Hsu и Klatt (1958) да проявяват кариотипен полиморфизъм и да съдържат "маркерни" хромозоми, силно характерни за отделните клетъчни щамове и напълно различни от нормалните миши хромозоми. В друго проучване Hsu (1959) наблюдава модални хромозомни числа от 67 до 73 в 12 щама на миши клетки. Силно полиплоидните клетки не са рядкост. Levan и Biesele (1958) наблюдават постепенно увеличаване на броя на полиплоидните клетки в културите на миши ембрионални клетки. Полиплоидните клетки обикновено могат да бъдат открити в началото на живота на културите и техният дял в популацията може да бъде увеличен чрез лечение с колхицин (Hsu and Kellogg, 1960). Една подлиния (L-P59) на NCTC клон 929 щам L, изследван от Hsu (1960), съдържа 63 до 65 хромозоми, включително много забележим дълъг субтелоцентричен (хромозома D). Произведената подлиния Ейми от L-P59 имаше среден брой хромозоми от 128 (с две D хромозоми), а подлиния Барбара имаше 58 до 59 без D маркера, но с голяма метацентрична хромозома, известна като Виктория. В смесени култури стволовата линия L-P59 бързо обрасна Ейми или Барбара. Освен това е установено, че делът на D хромозомите в културите L-P59 е променлив в зависимост от честотата на субкултурата. Старите култури или култури, разделени само на всеки 2 седмици, съдържат средно повече от 1,5 D хромозоми на клетка. В култури, разделени два пъти седмично, популацията се променя на една с по-малко от една D хромозома на клетка. D хромозомата и вероятната изохромозома T са загубени от една подлиния (L-M) (Hsu and Merchant, 1961) и са съобщени нови отличителни маркери 2 години след първото проучване. Hsu (1961) разглежда темата за хромозомната еволюция в клетъчните популации.

Понякога се наблюдават миши клетъчни линии с диплоиден режим. Billen и Debrunner (1960) имат клетки от нормален костен мозък на мишка, които остават диплоидни за повече от 1 година. Линия (H 2 ), започнала от клетки от перитонеума на C3H мишка, запази своя диплоиден характер в продължение на най-малко 5 месеца, преди да стане предимно тетраплоидна с малка част от хиподиплоидни (38) клетки, които постепенно намаляват (Hsu et al., 1961 г.). Друга поредица от интригуващи хиподиплоидни клетъчни линии са лимфобластите MB III, възникнали през 1935 г. от спонтанен лимфосаркома T86157 при 286-дневна женска мишка (De Bruyn et al., 1949). Първичната линия (MB I) от клетки на лимфосаркома съдържа смесена популация от тумор-продуциращи лимфобласти (s = 40 или 41) и тумор-отрицателни фибробласти (s = 56). Линиите MB III са подлинии на лимфобласти, свободни от фибробласти, които са станали тумор-отрицателни и хиподиплоидни (s = 30 до 32). За разлика от много нормални клетки, които се подлагат на "спонтанна" трансформация in vitro в клетки, произвеждащи тумор, нито MB III (лимфобласти), нито MB II (фибробласти), въпреки голямата морфологична вариабилност и честите митотични смущения, произвеждат тумори in vivo след около 27 години живот in vitro (De Bruyn and Hansen-Melander, 1962).

Установено е, че радиочувствителността на подлиниите на щам L миши клетки, измерена чрез способността им да образуват макроскопични колонии, е независима от броя на хромозомите в клетъчни линии със среден брой хромозоми между 53 и 109 (Till, 1961 b). Хромозомните аномалии, придобити по време на in vivo, чрез инжектиране на тератоген по време на бременност, персистират в тъканите на плода по време на клетъчна култура, третираните клетки показват 50 процента полиплоидия, а контролите само 2 процента (Ingalls et al., 1963).

Клетъчна хибридизация. Чрез създаване на култури от популации от два типа клетки, всяка от които съдържа забележими маркерни хромозоми, могат да бъдат произведени клетки, съдържащи и двата набора хромозоми. Sorieul и Ephrussi (1961), Barski (1961) и Barski et al. (1961 а) откриват такива "хибридни" клетки в смесени култури от клетки от NCTC 2472 (линия с висок рак) и NCTC 2555 (линия с нисък рак). И двете линии взеха своя краен произход от един -единствен клон на нормални клетки, който произвежда оригиналните "високи" и "ниски" линии (Sanford et al., 1954), по -късно обозначени съответно NCTC 1742 и NCTC 2049. NCTC 2472 е получен от NCTC 1742 (Sanford et al., 1961 e) и NCTC 2555 от NCTC 2049 (Woods et al., 1959). Линията с висок рак NCTC 2472 (N1) има модален хромозомен брой от 55 телоцентрика, един от които е много дълъг (Barski et al., 1961 b). Нискораковата линия NCTC 2555 (N2) има модален брой хромозоми от 62, с от 9 до 19 двураменни хромозоми. След 104 дни в смесена култура започват да се появяват клетки от тип М, със 115 до 116 хромозоми, от които 9 до 15 са метацентрични и в които обикновено може да се идентифицира изключително дългата телоцентрична хромозома. Клетки от М тип никога не са били открити само в култури от N1 или N2 клетки (Barski и Cornefert, 1962), но М клетките могат да бъдат произведени in vivo, както и in vitro, в тумори, произведени чрез инокулиране на C3H мишки със смесени клетъчни популации. Хибридните характеристики на клонираните М линии остават стабилни за най-малко 1 година. Barski и Belehradek (1963) демонстрират цинефотомикрографски, че ядреният трансфер може да се осъществи в смесени култури от N1 клетки с нормални миши ембрионални клетки. Това може да се случи многократно в смесени култури или, както посочват Ephrussi и Sorieul (1962), не е невъзможно хибридните популации "да са възникнали от едно чифтосване, включващо модални клетки от двете родителски линии, последвано от бързо разделяне".

Техниките за култивиране на органи са описани в учебниците на Parker (1961), Paul (1961), White (1963) и Merchant et al. (1964), и са посочени в основните статии и обзорни статии на основните практикуващи метода, напр. , Wolff (1952), Fell (1953, 1954, 1955, 1958, 1964), Gaillard (1942, 1948, 1953), Borghese (1958), Kahn (1958), Lasnitzki (1958, 1965), Trowell (1959, 1961 б) и Гробщайн (1962).

Органната култура се използва главно за (1) поддържане на структурната организация в тъканите, които трябва да бъдат подложени на експериментално разнообразна среда (напр. на хормони, лекарства или радиация) (2) изследване на морфогенезата, диференциацията и функцията в изрязаните органи или предполагаеми органи и (3) за сравнение на растежа и поведението на експлантирани органи с растежа и поведението на подобни органи в седнало положение.

Почти всеки орган на мишката е култивиран in vitro. Някои от основните препратки към отглеждането на миши органи са изброени в Таблица 25-1.

Променливите на околната среда, изследвани с помощта на органни култури, включват: радиация ( Trowell, 1961 a Lasnitzki, 1961 a , 1961 c , 1961 d Borghese, 1961), витамини, главно витамин A (Fell and Mellanby, 1952, Lasnitzki 1958, b, 19 1961 c, 1962 New 1962) и канцерогени (Lasnitzki, 1958 Lasnitzki and Lucy, 1961). Органната култура е особено подходяща за изследване на хормоните (Fell, 1964) и осигурява отличен начин за разграничаване на ефектите на отделни или комбинации от няколко хормона върху определени структури (Таблица 25-2).

Млечната жлеза е един от най-често отглежданите органи на мишката и освен използването й за изследване на отговорите на хормоните, е изследвана за нейната секреторна активност (Lasfargues, 1957 b Lasfargues и Feldman, 1963) и като средство за туморния агент на млечната жлеза (Lasfargues et al., 1958). Изследвани са токсичните ефекти на стероидните хормони върху млечните аденокарциноми на C3H мишки в органна култура (Rivera et al., 1963).

Култивирането на миши яйцеклетки (Whitten, 1956, 1957 Tarkowski, 1959 a, 1959 b) направи възможно производството in vitro на генотипно мозаечни ембриони от слети яйца (Tarkowski, 1961, 1963, 1963, Mintz, 1926).

Органната култура допринесе значително за нашето разбиране за ембрионалната индукция и за контрола на морфогенезата чрез съпоставяне на специфични клетъчни типове. Ефектите на специфични мезенхимни елементи върху епителните структури са изяснени, напр. , от Боргезе ( 1950 a , 1950 b ), Гробщайн ( 1953 a , 1953 b , 1953 c , 1955 a , 1955 b , 1956, 1957, 1959, 1962), Grobstein19b и Grobstein15 Dalton (1955) и Auerbach (1960, 1961 a, 1961 b). Индукцията на хрущяла е изследвана в ембриони на BALB / c x C3H от Grobstein и Parker (1954) и Grobstein и Holtzer (1955) и в T / T ембриони от Bennett (1958).

Пионерската работа на Hardy (1949, 1951) в растежа на косата и космените фоликули е последвана от Cleffman (1963) с изследвания на образуването на пигмент в меланоцитите на космените фоликули на агути мишки.

Мишката се превърна в един от видовете избор за обзавеждане на тъкани за клетъчни и органни култури. Фонд от основна информация за тъканната култура на мишки нараства, голяма част от която се отнася до работата с тъкани от инбредни щамове мишки. Доколкото генетичната история на култивираните клетки и органи, както и тяхната последваща история на култивиране, е уместна за наблюдаваното им поведение, тази информация ще бъде ценна за бъдеща работа по характеризирането, функцията и промяната на соматичните клетки.

1 Написването на тази глава беше частично подкрепено с безвъзмездна финансова помощ от Фондация „Джон А. Хартфорд“.

Алешио, Т. 1960 г. a. Osservazioni su organiotipiche на културата от polmone embrionale di topo. арх. итал. Анат. Rmbriol. 65: 323-363.
Вижте също PubMed.

Алесио, Т. 1960 г. б. La culture du poumon embryonnaire de souris. Анат. Анц. 109: 144-149.

Анон. 1958. Номенклатура на клетъчни щамове. J. Nat. Рак Инст. 20: 439.

Ансевин, К. Д. и Р. Буксбаум. 1962. Капацитет за хистологична реконструкция от бъбречни клетки на мишка във връзка с възрастта. J. Gerontol. 17: 130-137.
Вижте също PubMed.

Asayama, S.I., and M. Furusawa. 1961. Полова диференциация на първични гонади на миши ембрион след култивиране in vitro. японец J. Exp. Morphol. 15: 34-47.

Auerbach, R. 1960. Морфогенетични взаимодействия в развитието на тимусните жлези на мишката. Развийте. биол. 2: 271-284.
Вижте също PubMed.

Ауербах, Р. 1961 г. а. Генетичен контрол на тимусната лимфоидна диференциация. Proc. Natl. Акад. Sci. 47: 1175-1181.
Вижте също PubMed.

Auerbach, R. 1961 b. Експериментален анализ на произхода на клетъчните типове в развитието на миши тимус. Развивайте се. биол. 3: 336-354.
Вижте също PubMed.

Auerbach, R. 1963. Изследвания за развитие на миши тимус и далак. Нац. Рак Инст. Monogr. 11: 23-33.
Вижте също PubMed.

Auerbach, R. и C. Grobstein. 1958. Индуктивно взаимодействие на ембрионални тъкани след дисоциация и реагрегация. Exp. Cell Res. 15: 384-397.
Вижте също PubMed.

Barski, G. 1961. Клонира целулари "хибриди" изол és à partir de culture целуларни смеси. Compt. Ренд. Акад. Sci. 253: 1186-1188.
Вижте също PubMed.

Barski, G., and J. Belehradek. 1963. Transfert nucléaire intercellulaire en cultures mixtes. Exp. Cell Res. 29: 102-111.
Вижте също PubMed.

Barski, G., J. L. Biedler и F. Cornefert. 1961 г. а. Промяна на характеристиките на клетъчна линия мишка in vitro след увеличаване на нейния тумор-продуциращ капацитет. J. Nat. Рак Инст.26: 865-889.
Вижте също PubMed.

Барски, Г. и Р. Касигена. 1963. Злокачествена трансформация in vitro на клетки от нормална белодробна тъкан на мишка C57BL. J. Nat. Рак Инст. 30: 865-883.
Вижте също PubMed.

Барски, Г. и Ф. Корнеферт. 1962. Характеристики на клонирани клетъчни линии от "хибриден" тип, получени от смесени култури in vitro. J. Nat. Рак Инст. 28: 801-821.
Вижте също PubMed.

Barski, G., S. Sorieul, and F. Cornefert. 1961 г. б. Клетки от "хибриден" тип в комбинирани култури от два различни клетъчни щама на бозайници. J. Nat. Рак Инст. 26: 1269-1291.
Вижте също PubMed.

Бенет, Д. 1958. In vitro изследване на индуцирането на хрущяла при T / T мишки. Nature 181: 1286.
Вижте също MGI.

Berman, I. и H.S. Каплан. 1960. Функционалният капацитет на клетки от костен мозък на мишки, растящи в дифузионни камери. Exp. Cell Res. 20: 238-239.
Вижте също PubMed.

Berwald, Y., and L. Sachs. 1963. In vitro клетъчна трансформация с химически канцерогени. Nature 200: 1182-1184.
Вижте също PubMed.

Biesele, J.J., J.L. Biedler и D.J. Хътчисън. 1959. Хромозомен статус на резистентни към лекарства сублинии на миша левкемия L1210, p. 295-307. В: Генетика и рак. 13-ти симп. Fundamental Cancer Res. University of Texas Press, Остин.

Бигърс, J.D., P.J. Claringbold и M.H. Харди. 1956. Действието на естрогените върху влагалището на мишката в тъканната култура. J. Physiol. 131: 497-515.
Вижте също PubMed.

Biggers, J.D., R.B.L. Гуаткин и Р. Л. Бринстър. 1962. Развитие на миши ембриони в органични култури на фалопиевите тръби върху химически определена среда. Nature 194: 747-749.
Вижте също PubMed.

Бигърс, J.D., R.B.L. Gwatkin и S. Heyner. 1961. Растеж на ембрионални тибии на птици и бозайници върху относително проста химически определена среда. Exp. Клетка. Res. 25: 41-58.
Вижте също PubMed.

Biggers, J.D., L.M.Rinaldini и M. Webb. 1957. Изследването на растежните фактори в тъканната култура. Symp. Soc. Exp. биол. 11: 264-297.
Вижте също PubMed.

Билън, Д. и Г.А. Дебрунер. 1960. Непрекъснато размножаващи се клетки, получени от нормален костен мозък на мишка. J. Nat. Рак Инст. 25: 1127-1139.

Боргезе, Е. 1950 г. а. Развитието in vitro на подмандибуларните и сублингвалните жлези на Mus musculus. J. Anat. 84: 287-302.
Вижте също PubMed.

Боргезе, Е. 1950 b. Експлантационни експерименти върху влиянието на съединителнотъканната капсула върху развитието на епителната част на подчелюстната жлеза на Mus musculus. J. Anat. 84: 303-318.
Вижте също PubMed.

Боргезе, Е. 1958. Органна диференциация в културата, стр. 704-773. В W.D. McElroy и B. Glass [ред.] Симпозиум за химическата основа на развитието. Johns Hopkins Press, Балтимор.

Borghese, E. 1961. Ефектът на йонизиращите лъчения върху ембрионалните бели дробове на мишка, развиващи се in vitro. Ан. Ню Йорк Акад. Sci. 95: 866-872.
Вижте също PubMed.

Боргезе, Е. и М. А. Венини. 1956. Култура in vitro di gonadi embrionale di Mus musculus. Symp. Genet. (Павия) 5: 69-83.

Бранд, K.G. и J. Syverton. 1962. Резултати от видово-специфични тестове за хемаглутинация върху "трансформирани", нетрансформирани и първични клетъчни култури. J. Nat. Рак Инст. 28: 147-157.
Вижте също PubMed.

Камерън, И.Л. 1964. Постоянна ли е продължителността на синтеза на ДНК в соматичните клетки на бозайници и птици? J. Cell Biol. 20: 185-188.
Вижте също PubMed.

Cann, H.M. и L.A. Herzenberg. 1963 г. а. In vitro проучвания на вариациите на соматични клетки при бозайници. I. Откриване на H-2 фенотип в клетъчни линии от миши култури. J. Exp. Med. 117: 259-265.
Вижте също PubMed.

Cann, H. M. и L.A. Herzenberg, 1963 г. In vitro проучвания на вариации на соматични клетки при бозайници. II. Изоимунна цитотоксичност с култивиран миши лимфом и селекция на резистентни варианти. J. Exp. Med. 117: 267-283.
Вижте също PubMed.

Чен, Дж. М. 1952 а. Изследвания върху морфогенезата на гръдната кост на мишката. I. Нормално ембрионално развитие. J. Anat. 86: 373-387.
Вижте също PubMed.

Чен, Дж. М. 1952 г. б. Изследвания върху морфогенезата на гръдната кост на мишката. II. Експерименти за произхода на гръдната кост и способността й за самодиференциране in vitro. J. Anat. 86: 387-401.
Вижте също PubMed.

Chen, J.M. 1953. Изследвания върху морфогенезата на гръдната кост на мишката. III. Експерименти за затваряне и сегментиране на гръдната кост. J. Anat. 87: 130-149.
Вижте също PubMed.

Чу, Е.Х.Й. 1962. Хромозомна стабилизация на клетъчни щамове. Нац. Рак Инст. Monogr. 7: 55-62.
Вижте също PubMed.

Chu, E.H.Y. и V. Monesi. 1960. Анализ на индуцирани от рентгенови лъчи хромозомни аберации в миши соматични клетки in vitro. Генетика 45: 981.

Чу, Е.Х.Й., К.К. Санфорд и Р. Р. Ърл. 1958. Сравнителни хромозомни изследвания върху клетки на бозайници в култура. II. Клетъчни щамове, произвеждащи сарком на мишка, и техните производни. J. Nat. Рак Инст. 21: 729-751.
Вижте също PubMed.

Cleffmann, G. 1963. Пигментни клетки Agouti in situ и in vitro. Ан. Н.Ю. Акад. Sci. 100: 749-761.
Вижте също PubMed.

Conklin, J.L., M.M. Дюи и Р. Х. Кан. 1962. Цитохимична локализация на някои окислителни ензими. Амер. J. Anat. 110: 19-27.
Вижте също PubMed.

Кумбс, R.R.A. 1962. Идентифициране и характеризиране на клетки чрез имунологичен анализ със специално отношение към смесената аглутинация. Нац. Рак Инст. Monogr. 7: 91-98.
Вижте също PubMed.

Coombs, R.R.A., M.R. Daniel, B.W. Gurner и A. Kelus. 1961. Видово-характеризиращи антигени на "L" и "ERK" клетки. Nature 189: 503-504.
Вижте също PubMed.

Coriell, L.L., M.G. Tall и H. Gaskill. 1958. Общи антигени в клетъчните линии на тъканната култура. Наука 128: 198-199.
Вижте също PubMed.

Дейвънпорт, Х. У., В. Дженсън и Л. А. Уудбъри. 1948. Секрецията на киселина от стомаха на мишката in vitro. Гастроентерология 11: 227-239.

Дейвидсън, П. и М. Х. Харди. 1952. Развитието на миши вибриси in vivo и in vitro. J. Anat. 86: 342-356.
Вижте също PubMed.

Dawe, C.J. и L.W. Закон. 1959. Морфологични промени в тъканта на слюнчените жлези на новородена мишка, изложена на паротиден туморен агент in vitro. J. Nat. Рак Инст. 23: 1157-1177.
Вижте също PubMed.

Дей, М. и Дж. П. Грийн. 1962. Усвояването на аминокиселини и синтеза на амини от неопластични мастоцити в култура. J. Physiol. 164: 210-226.
Вижте също PubMed.

De Bruyn, W.M., and E. Hansen-Melander. 1962. Хромозомни изследвания при лимфосаркома на мишка MB. J. Nat. Рак Инст. 28: 1333-1354.
Вижте също PubMed.

De Bruyn, W.M., R. Korteweg и E. Kits van Waveren. 1949. Трансплантируем лимфосаркома на мишка T86157 (MB), изследван in vivo, in vitro и при аутопсия. Рак Res. 9: 282-293.

Дефенди, В. и Л. А. Менсън. 1963. Анализ на жизнения цикъл в клетките на бозайници. Nature 198: 359-361.

Dulbecco, R. и M. Vogt. 1960. Значение на продължаващото производство на вируси в тъканни култури, превърнати в неопластични от полиома вирус. Proc. Natl. Акад. Sci. 46: 1617-1623.
Вижте също PubMed.

Дън, Т. Б. и М. Потър. 1957. Неоплазма за трансплантация на мастоцити при мишка. J. Nat. Рак Инст. 18: 587-596.
Вижте също MGI.

Ърл, W.R. 1928 г. а. Изследвания върху ефекта на светлината върху кръвните и тъканните клетки. I. Действието на светлината върху белите кръвни клетки in vitro . J. Exp. Med. 48: 457-474.

Ърл, W.R. 1928 г. б. Изследвания върху ефекта на светлината върху кръвните и тъканните клетки. II. Действието на светлината върху еритроцитите in vitro . J. Exp. Med. 48: 667-681.

Ърл, W.R. 1928 c. Изследвания върху ефекта на светлината върху кръвните и тъканните клетки. III. Действието на светлината върху фибробластите in vitro. J. Exp. Med. 48: 683-694.

Earle, W.R. 1943. Производство на злокачествено заболяване in vitro. IV. Култури на миши фибробласти и промени, наблюдавани в живите клетки. J. Nat. Рак Инст. 4: 165-212.

Ърл, W.R., и A. Nettleship. 1943. Производство на злокачествено заболяване in vitro. V. Резултати от инжектиране на култури в мишки. J. Nat. Рак Инст. 4: 213-227.

Earle, W.R., E. Shelton и E.L. Шилинг. 1950. Производство на злокачествено заболяване in vitro. XI. Допълнителни резултати от повторно инжектиране на in vitro клетъчни щамове в щам C3H мишки. J. Nat. Рак Инст. 10: 1105-1113.
Вижте също PubMed.

Едуардс, Р.Г. 1961. Идентификация на хромозомните комплементи на новородени и възрастни живи мишки. Nature 192: 1316-1317.
Вижте също PubMed.

Elias, J.J. 1957. Култивиране на млечна жлеза за възрастни мишки в синтетична среда, обогатена с хормони. Наука 126: 842-844.
Вижте също PubMed.

Elias, J.J. 1962. Реакция на крайните пъпки на миши млечни канали към инсулин в културата на органи. Exp. Cell Res. 27: 601-604.

Elias, J.J. и E. Rivera. 1959. Сравнение на отговорите на нормални, предракови и неопластични миши тъкани на млечната жлеза с хормони in vitro. Рак Res. 19: 505-511.
Вижте също PubMed.

Ephrussi, B., and S. Sorieul. 1962. Чифтосване на соматични клетки in vitro, с. 81-97. В D.J. Merchant and J.V. Neel [ред.] Подходи към генетичния анализ на клетки от бозайници. University of Michigan Press, Ан Арбър.

Evans, V.J., N.M.Howkins, B.B. Westfall и W.R. Earle. 1958. Изследвания върху културни линии, получени от паренхиматозни клетки на черния дроб на мишка, отглеждани в дългосрочна тъканна култура. Рак Res. 18: 261-266.
Вижте също PubMed.

Evans, V.J., G.A. Паркър и Т.Б. Дън. 1964. Неопластични трансформации в ембрионална тъкан на C3H мишка in vitro, определени чрез вътреочен растеж. I. Клетки от химически дефинирана среда със или без серумна добавка. J. Nat. Рак инст. 32: 89-121.
Вижте също PubMed.

Fedoroff, S. 1962. Метод за разграничаване между човешки и миши клетки в тъканна култура. Nature 196: 394-395.
Вижте също PubMed.

Fedoroff, S. 1966. Доклад за номенклатурата на културата от животински тъкани. Тъканна култура ст.н.с. Comm. по номенклатурата. Да бъдат публикувани.

Fedoroff, S., and B. Cook. 1959. Ефекти на човешкия кръвен серум върху тъканната култура. II. Развитие на резистентност към токсичен човешки серум в клетки, подобни на фибробласти (L щам на Ърл), получени от C3H мишка. J. Exp. Med. 109: 615-632.
Вижте също PubMed.

Фел, H.B. 1953. Последните постижения в културата на органи. Sci. Прогр. 162: 212-231.

Fell, H.B. 1954. Ефектът на хормоните и витамин А върху културите на органите. Ан. Ню Йорк Акад. Sci. 58: 1183-1187.
Вижте също PubMed.

Fell, H.B. 1955. Ефектът на хормоните върху диференцираните тъкани в културата, стр. 138-148. В R.W. Smith, O.H. Gaebler и C.N.H. Дълъг [ред.] Хипофизен растежен хормон, природа и действия. Макгроу-Хил, Ню Йорк.

Fell, H.B., 1956. Ефект на излишния витамин А върху организираните тъкани, култивирани in vitro. Британец. Med. Бик. 12: 35-37.
Вижте също PubMed.

Фел, H.B. 1958. Физиологията на скелетната тъкан в културата. Лект. Sci. Basis Med. 6: 28-45.

Fell, H.B. 1964. Ролята на органичните култури в изследването на витамини и хормони. Вит. Хорм. 22: 81-127.
Вижте също PubMed.

Fell, H.B. и A.F.W. Хюз. 1949. Митоза при мишка: Изследване на живи и фиксирани клетки в тъканни култури. Кварт. J. Microscop. Sci. 90: 355-380.

Фел, Х. Б. и Е. Меланби. 1950. Ефекти на хипервитаминоза А върху фетални миши кости, култивирани in vitro предварителна комуникация. Британец. Med. J. 2: 535-539.
Вижте също PubMed.

Fell, H.B. и E. Mellanby. 1952. Ефектът на хипервитаминоза А върху ембрионални крайници, култивирани in vitro. J. Physiol. 116: 320-349.
Вижте също PubMed.

Fernandes, M.A.R. и I. Koprowska. 1963. Изследвания на тъканни култури върху клетки от шийката на мишката, подложени на канцерогенно лечение. Acta Cytol. 7: 215-223.
Вижте също PubMed.

Фишър, G.A. 1959. Хранителни и аметоптерин-резистентни характеристики на левкемични клонове. Рак Res. 19: 372-376.

Francke, C. 1946. Ефектът на гонадотропините върху експлантираните фрагменти от яйчници от мишки с неопределен вид. Ендокринология 39: 430-431.

Franks, L. M. 1959. Фактор в нормалния човешки серум, който инхибира епителния растеж в културите на органи. Exp. Cell Res. 17: 579-581.
Вижте също PubMed.

Franks, L.M. 1961. Растежът на мишата простата по време на култивиране in vitro в химически дефинирана и естествена среда и след трансплантация in vivo. Exp. Cell Res. 22: 56-72.
Вижте също PubMed.

Франкс, L.M., и A.A. Бартън. 1960. Ефектите на тестостерона върху ултраструктурата на миши простата in vivo и в културите на органи. Exp. Cell Res. 19: 35-50.
Вижте също PubMed.

Fr éd éric, J. 1954. Effect de diff érentes longueurs d'onde du spectre видимо sur des cellules vivantes cultiv ées in vitro. Compt. Ренд. Soc. биол. 148: 1678-1682.
Вижте също PubMed.

Gaillard, P. J. 1942. Хормони, регулиращи растежа и диференциацията в ембрионалните експлантати. Масон, Париж. 82 стр.

Gaillard, P. J. 1948. Растеж, диференциация и функция на експлантатите на някои жлези с вътрешна секреция. Symp. Soc. Exp. биол. 2: 139-144.

Gaillard, P.J. 1953. Растеж и диференциация на експлантирани тъкани. Int. Rev. Cytol. 2: 331-401.

Gaillard, P.J. 1961 a. Влиянието на екстракта от паращитовидната жлеза върху експлантирания радиус на ембрионите на мишки албиноси. II. Proc. Koninkl. Нед. Акад. Wetensch. Ser. C64: 119-128.

Gaillard, P.J. 1961 г. б. Паращитовидна жлеза и кост в тъканна култура, стр. 20-45. В R.O. Greep и R.V. Talmage [ред.] Паращитовидните жлези. Чарлз С Томас, Спрингфийлд, Илинойс.

Gaillard, P.J. 1962. Сравнително изследване на влиянието на тироксина и на екстракта от паращитовидна жлеза върху хистологичната структура на експлантирания рудимент на ембрионален радиус. Акта Морфол. Neer.-Scand. 5: 21-36.
Вижте също PubMed.

Gaillard, P. J. 1963. Наблюдения върху ефекта на щитовидната и паращитовидната секреция върху експлантираните радиусни зачатки на мишка. Развивайте се. биол. 7: 103-116.
Вижте също PubMed.

Gelfant, S. 1960. Изследване на митозата в миши епидермис in vitro. III. Ефекти на глюколитични и междинни продукти от цикъла на Кребс. IV. Ефекти на метаболитни инхибитори. Exp. Cell Res. 19: 65-82.
Вижте също PubMed.

Geyer, R.P. 1958. Хранене на клетки от бозайници в тъканна култура. Nutr. Откр. 16: 321-323.
Вижте също PubMed.

Gillette, R.W., A. Findley и H. Conway. 1961. Ефект на кортизон върху кожата, поддържан в културата на органите. J. Nat. Рак Инст. 27: 1285-1309.
Вижте също PubMed.

Ginsburg, H. 1963. Диференциацията in vitro и културата на нормални мастоцити от миши тимус. Ан. Н.Ю. Акад. Sci. 103: 20-39.
Вижте също PubMed.

Ginsburg, H., and L. Sachs. 1963. Образуване на чисти суспензии на мастоцити в тъканна култура чрез диференциация на лимфоидни клетки от миши тимус. J. Nat. Рак Инст. 31: 1-39.
Вижте също PubMed.

Gluecksohn-Waelsch, S. и T.R. Rota, 1963. Развитие в култура на органна тъкан на бъбречни рудименти от миши ембриони. Развивайте се. биол. 7: 432-444.
Вижте също MGI.

Goldhaber, P. 1960. Поведение на костите в тъканната култура. кръчма. Амер. ас. адв. Sci. 64: 349-372.

Грийн, J.P. и M. Day. 1960. Хепарин, 5-хидрокситриптамин и хистамин в неопластични мастоцити. Биохимия. Pharmacol. 3: 190-205.
Вижте също PubMed.

Grobstein, C. 1950. Поведение на миши ембрионален щит в плазмени съсиреци. J. Exp. Zool. 115: 297-314.

Grobstein, C. 1953 a. Епителио-мезенхимна специфичност в морфогенезата на миши субмандибуларни рудименти in vitro. J. Exp. Zool. 124: 383-413.

Grobstein, C. 1953 г. б. Анализ in vitro на ранната организация на зачатъците на мишката субмандибуларна жлеза. J. Morphol. 93: 19-44.

Grobstein, C. 1953 c. Индуктивно епителио-мезенхимно взаимодействие в зачатъци на култивирани органи на мишката. Наука 118: 52-55.
Вижте също PubMed.

Гробщайн, C. 1955 a. Индуктивно взаимодействие в развитието на миши метанефрос. J. Exp. Zool. 130: 319-339.

Гробщайн, C. 1955 b. Тъканно взаимодействие в морфогенезата на миши ембрионални зачатъци in vitro, стр. 233-256. В Д. Рудник [ред.] Аспекти на синтеза и реда в растежа. Princeton University Press, Принстън, Ню Джърси

Grobstein, C. 1956. Трансфилтърна индукция на тубули в миши метанефрогенен мезенхим. Exp. Cell Res. 10: 424-440.
Вижте също PubMed.

Grobstein, C. 1957. Някои характеристики на предаването на влиянието на миши метанефроген мезенхим, предизвикващо тубулите. Exp. Cell Res. 13: 575-587.
Вижте също PubMed.

Grobstein, C. 1959. Авторадиография на междузоната между тъканите при индуктивно взаимодействие. J. Exp. Zool. 142: 203-213.
Вижте също PubMed.

Grobstein, C. 1962. Интерактивни процеси в цитодиференциацията. J. Cell. Comp. Physiol. 60 (Допълнение 1): 35-48.

Grobstein, C. и A.J. Далтън. 1957. Индукция на бъбречните тубули при миши метанефрогенен мезенхим без цитоплазмен контакт. J. Exp. Zool. 135: 57-73.
Вижте също PubMed.

Grobstein, C. и H. Holtzer. 1955. In vitro изследвания на индукция на хрущяла в мезодерма на миши сомити. J. Exp. Zool. 128: 333-358.

Grobstein, C., and G. Parker. 1954. Ин витро индукция на хрущял в миша сомит мезодерма чрез ембрионална гръбначна карта. Proc. Soc. Exp. биол. Med. 85: 477-481.
Вижте също PubMed.

Guthrie, M.J. 1953. Повишаване на растежа в експлантирания яйчник на новородената мишка от неорганичен фосфат и аденин. Анат. Rec. 115: 314-315.

Ханкс, Дж. Х. 1955. Хранене на клетките in vitro, с. 74-82. Във въведение в клетъчната и тъканната култура. Бърджис, Минеаполис.

Харди, M.H. 1949. Развитието на миши косми in vitro с някои наблюдения върху пигментацията. J. Anat. 83: 364-384.
Вижте също PubMed.

Харди, М.Х. 1950. Развитието in vitro на млечните жлези на мишката. J. Anat. 84: 388-393.
Вижте също PubMed.

Харди, М.Х. 1951. Развитието на косми и вибриси от кожата в тъканна култура. Ан. Н.Ю. Акад. Sci. 53: 546-561.
Вижте също PubMed.

Харди, М. Х., Дж. Д. Бигърс и П. Дж. Кларингболд. 1953. Вагинална роговица на мишка, произведена от естрогени in vitro. Nature 172: 1196-1197.
Вижте също PubMed.

Харис, М. 1964. Клетъчна култура и соматични вариации. Холт, Ню Йорк, 547 стр.

Хаушка, Т.С. 1957. Тъканна генетика на неопластични клетъчни популации. Мога. Рак Res. конф. 2 (1956): 305-345.
Вижте също PubMed.

Хаушка, Т.С. 1958. Връзка на хромозомните и физиологичните промени в туморите. J. Cell. Comp. Physiol. 52: 197-267.
Вижте също PubMed.

Хобс, Г. Л., К. К. Санфорд, В. Дж. Евънс и Р. Р. Ърл. 1957. Създаване на клонинг на миши чернодробни клетки от една изолирана клетка. J. Nat. Рак Инст. 18: 701-708.
Вижте също PubMed.

Hsu, T.C. 1959. Хромозоми на бозайници in vitro. XI. Променливост между потомството на една клетка, стр. 129-134. В: Biol. Принос. No 5914, Унив. Тексас, Остин.

Hsu, T.C. 1960. Хромозоми на бозайници in vitro. XIII. Циклични и насочени промени в структурата на населението. J. Nat. Рак Инст. 25: 1339-1353.
Вижте също PubMed.

Hsu, T.C. 1961. Хромозомна еволюция в клетъчните популации. Int. Rev. Cytol. 12: 69-161.
Вижте също PubMed.

Hsu, T.C., D. Billen и A. Levan. 1961. Хромозоми на бозайници in vitro. XV. Модели на трансформация. J. Nat Cancer Inst. 27: 515-541.
Вижте също PubMed.

Hsu, T.C. и D.S. Kellogg. 1959 г.Генетика на in vitro клетки, стр. 183-204. В генетиката и рака. 13-ти симп. Fundamental Cancer Res. University of Texas Press, Остин.

Hsu, T.C. и D.S. Kellogg. 1960. Хромозоми на бозайници in vitro. XII. Експериментална еволюция на клетъчните популации. J. Nat. Рак Инст. 24: 1067-1093.
Вижте също PubMed.

Hsu, T.C. и O. Klatt. 1958. Хромозоми на бозайници in vitro. IX. Върху генетичния полиморфизъм в клетъчните популации. J. Nat. Рак Инст. 21: 437-473.
Вижте също PubMed.

Hsu, T.C. и D.J. търговец. 1961. Хромозоми на бозайници in vitro. XIV. Генотипно заместване в клетъчните популации. J. Nat. Рак Инст. 26: 1075-1083.
Вижте също PubMed.

Хънгърфорд, Д.А. 1955. Хромозомни числа от десетдневни фетални миши клетки. J. Morphol. 97: 497-510.

Ingalls, T.H., E.F. Ingenito и F.J. Curley. 1963. Придобити хромозомни аномалии, предизвикани при мишки чрез инжектиране на тератоген по време на бременност. Наука 141: 810-812.
Вижте също PubMed.

Ingram, R. L. 1962. Поддържане на организирана чернодробна тъкан при възрастни in vitro. Exp. Cell Res. 28: 370-380.
Вижте също PubMed.

Jacobs, B.B. 1963. In vivo анализ на функцията на миши яйчници след култивиране в обогатена с хормон среда. Exp. Cell Res. 32: 431-441.
Вижте също PubMed.

Kahn, R. H. 1958. Органна култура в експерименталната биология. Univ. Мичиган Мед. Бик. 24: 242-252.
Вижте също PubMed.

Kite, J.H. и D.J. търговец. 1961. Изследвания на някои антигени на миши фибробласт от L-щам. J. Nat. Рак Инст. 26: 419-434.
Вижте също PubMed.

Klein, E. 1960. За образуване на ензим, предизвикано от субстрат в животински клетки, култивирани in vitro. Exp. Cell Res. 21: 421-429.
Вижте също PubMed.

Klein, E. 1961. Изследвания върху субстратно-индуцирания синтез на аргиназа в животински клетъчни щамове, култивирани in vitro. Exp. Cell Res. 22: 226-232.

Koziorowska, J. 1962. Влиянието на яйчниковите хормони и инсулина върху млечните жлези на мишки, култивирани in vitro. Acta Med. пол. 3: 237-245.
Вижте също PubMed.

Крут, Р.С. [ред.] 1964. Соматична клетъчна генетика. University of Michigan Press, Ан Арбър.

Куф, Е. Л. и В. Дж. Евънс. 1961. β-Глюкуронидазна активност на култивирани клетки, получени от C3H миши черен дроб. J. Nat. Рак Инст. 27: 667-678.
Вижте също PubMed.

Lasfargues, E.Y. 1957 г. а. Култивиране и поведение in vitro на нормалния епител на млечната жлеза на възрастна мишка. Анат. Rec. 127: 117-129.
Вижте също PubMed.

Lasfargues, E.Y. 1957 г. б. Култивиране и поведение in vitro на нормалния млечен епител на възрастната мишка. II. Наблюдения върху секреторната активност. Exp. Cell Res. 13: 553-562.
Вижте също PubMed.

Lasfargues, E.Y. 1957 г. c. Компоративно поведение in vitro на нормалния и неопластичен млечен епител на мишката. Proc. Амер. ас. Рак Res. 2: 224.

Lasfargues, E.Y. 1960. Action de l'oestradiol et de la progestérone sure des cultures de glandes mammaires de jeunes souris. Compt. Ренд. Soc. биол. 154: 1720-1722.
Вижте също PubMed.

Lasfargues, E.Y. 1962. Относно ролята на инсулина в диференциацията и функционалната активност на тъканите на млечната жлеза на мишка. Exp. Cell Res. 28: 531-542.

Lasfargues, E.Y. и D.G. Фелдман. 1963. Хормонален и физиологичен фон в производството на B частици от епитела на млечната жлеза на мишката в органна култура. Рак Res. 23: 191-196.

Lasfargues, E.Y., D.H. Moore и M.R. Murray. 1958. Поддържане на млечния фактор в култури от епител на млечната жлеза на мишки. Рак Res. 18: 1281-1285.
Вижте също PubMed.

Ласфарг, Е.Ю., и М.Р.Мъри. 1959. Хормонални влияния върху диференциацията и растежа на ембрионална млечна жлеза от мишка в органна култура. Развивайте се. биол. 1: 413-435.

Lasnitzki, I. 1954. Ефектът на естрона самостоятелно и в комбинация с 20-метилхолантрен върху миши простатни жлези, отглеждани in vitro. Рак Res. 14: 632-639.
Вижте също PubMed.

Ласницки, И. 1955 а. Ефектът на тестостерон пропионат върху органни култури на мишата простата. J. Ендокринол. 12: 236-240.
Вижте също PubMed.

Ласницки, И. 1955 г. б. Влиянието на А хипервитаминоза върху ефекта на 20-метилхолантрен върху простатните жлези на мишки, отглеждани in vitro. Британец. J. Рак 9: 434-441.
Вижте също PubMed.

Ласницки, И. 1958. Ефектът на канцерогените, хормоните и витамините върху изрязването на органи. Int. Rev. Cytol. 7: 79-121.

Ласницки, И. 1961 а . Ефектът на радиацията върху нормалната и третирана с естрон вагина на мишка, отглеждана in vitro. Британец J. Radiol. 34: 356-361.
Вижте също PubMed.

Ласницки, И. 1961 б . Ефект на излишния витамин А върху нормалната и третирана с естрон миша вагина, отгледана в химически дефинирана среда. Exp. Cell Res. 24: 37-45.
Вижте също PubMed.

Ласницки, И. 1961 г. в. Действие и взаимодействие на радиация, естроген и витамин А върху мишата вагина, отгледана in vitro. Colloq. Int. Център Nat. Res. Sci. 101: 73-84.

Ласницки, И. 1961 г . Ефектът на рентгеновите лъчи върху клетъчната диференциация в културата на органите. Ан. Н.Ю. Акад. Sci. 95: 873-881.
Вижте също PubMed.

Ласницки, И. 1962. Хиповитаминоза-А в простатната жлеза на мишка, култивирана в химически определена среда. Exp. Cell Res. 28: 40-51.

Ласницки, И. 1965. Действието на хормоните върху клетъчните и органни култури, стр. 591-658. В E.N. Уилмър [ред.] Клетки и тъкани в културата. Том 1. Academic Press, Ню Йорк.

Lasnitzki, I., and J.A. Люси. 1961. Метаболизъм на аминокиселините и активност на аргиназа в миши простатни жлези, отглеждани in vitro със и без 20-метилхолантрен. Exp Cell Res. 24: 379-392.
Вижте също PubMed.

Леван, А., и J.J. Бизеле. 1958. Роля на хромозомите в канцерогенезата, изследвана в серийна тъканна култура на клетки на бозайници. Ан. Н.Ю. Акад. Sci. 71: 1022-1053.
Вижте също PubMed.

Леван, А. и Т. К. Хсу. 1960. Хромозомите на два миши щама от млечни карциноми на мишката. Hereditas 46: 231-240.

Левинтоу, Л. и Х. Игъл. 1961. Биохимия на култивирани клетки на бозайници. Анну. Rev. Biochem. 30: 605-640.

Lieberman, M. 1958. Култивиране на миши тимус в дифузионни камери in vivo. Proc. Амер. ас. Рак Res. 2: 321.

Лострох, А. Дж. 1959. Реакцията на яйчникови експлантати от постнатални мишки към гонадотропини. Ендокринология 65: 124-132.
Вижте също PubMed.

Лострох, A.J. 1960. In vitro отговор на миши тестиси към човешки хорион гонадотропин. Proc. Soc. Exp. биол. Med. 103: 25-27.
Вижте също PubMed.

Лострох, A.J. 1963. Ефекти на инсулин и на DL-алдостерон върху протеиновия синтез от мишки матки в култура на органи. Exp. Cell Res. 32: 327-332.
Вижте също PubMed.

Лукас, Д.Р. 1958. Наследена ретинална дистрофия при мишка: появата й в очите и ретините, култивирана in vitro. J. Embryol. Exp. Morphol. 6: 589-592.
Вижте също PubMed.

Лукас, Д.Р., и О.А. Троуел. 1958. In vitro култура на окото и ретината на мишка и плъх. J. Embryol. Exp. Morphol. 6: 178-182.
Вижте също PubMed.

Ludovici, P.P., C. Ashford и N.F. Милър. 1962 г. а. Проучвания върху химически индуцирани и "спонтанни" промени на морфологията и растежния потенциал в човешката клетъчна култура. Рак Res. 22: 788-796.
Вижте също PubMed.

Ludovici, P.P., C. Ashford и N.F. Милър. 1962 б. Изследвания на химикалите, необходими за предизвикване на промени в морфологията и потенциала за растеж в човешката клетъчна култура. Рак Res. 22: 797-803.
Вижте също PubMed.

Magee, W.E., M.R. Sheek и B.P. Сагик. 1958. Методи за събиране на клетки от бозайници, отгледани в тъканна култура. Proc. Soc. Exp. биол. Med. 99: 390-392.
Вижте също PubMed.

Maio, J.J. и H.V. Рикенберг. 1960. β-галактозидазата на миши щам L-клетки и миши органи. Биохимия. Биофиз. Акта 37: 101-106.
Вижте също PubMed.

Manson, L.A., G.V. Foschi, J.F. Duplan и O.B. Заалберг. 1962 г. а. Изолиране на трансплантационни антигени от левкемична клетка, отгледана "in vitro". Ан. Н.Ю. Акад. Sci. 101: 121-130.

Менсън, Ел Ей, Г.В. Foschi и J. Palm. 1962 г. б. In vivo и in vitro проучвания на антигени на хистосъвместимост, изолирани от култивирана клетъчна линия на мишка. Proc. Нац. Акад. Sci. 48: 1816-1821.
Вижте също PubMed.

Martin, L. 1959. Растеж на вагиналния епител на мишката в тъканна култура. J. Ендокринол. 18: 334-342.
Вижте също PubMed.

Мартинович, П.Н. 1938. Развитието in vitro на половите жлези на бозайници. Яйчници и овогенеза. Proc. Рой. Soc. B 125: 232-249.

Мартинович, П.Н. 1939. Ефектът на субнормалната температура върху диференциацията и оцеляването на култивирани in vitro ембрионални и инфантилни яйчници на плъхове и мишки. Proc. Рой. Soc. B 128: 138-143.

McCarthy, B.J. и B.H. Хойер. 1964. Идентичност на ДНК и разнообразие от молекули на информационната РНК в нормалните миши тъкани. Proc. Нац. Акад. Sci. 52: 915-922.
Вижте също PubMed.

McCulloch, E.A., and J.E. Till. 1962. Чувствителността на клетките от нормален костен мозък на мишка към гама радиация "in vitro" и "in vivo". Радиат. Res. 16: 822-832.
Вижте също PubMed.

McKenna, J.M. и W.S. Блейкмор. 1962. Серологични сравнения между клетъчни линии на тъканни култури. Природа 195: 1009-1010.

McLaren, A. и J. D. Biggers. 1958. Успешно развитие и раждане на мишки, култивирани in vitro като ранни ембриони. Nature 182: 877-878.
Вижте също PubMed.

Merchant, D.J., R.H. Kahn и W.H. Мърфи. 1964. Наръчник по клетъчна и органна култура, 2-ро. изд. Бърджис, Минеаполис. 263 стр.

Merchant, D.J., and J.V. Neel [ed.] 1962. Подходи към генетичния анализ на клетки от бозайници. University of Michigan Press, Ан Арбър. 97 стр.

Минц, Б. 1962 а. Експериментално изследване на развиващото се яйце от бозайник: отстраняване на зоната пелуцида. Наука 138: 594-595.

Минц, Б. 1962 г. б. Включване на нуклеинова киселина и протеинови прекурсори чрез развиване на миши яйца. Амер. Zool. 2: 432.

Минц, Б. 1962 c. Образуване на генотипно мозаечни ембриони на мишки. Амер. Zool. 2: 432.

Mintz, B. 1963. Растеж in vitro на t 12 / t 12 смъртоносни мутантни яйца на мишка. Амер. Zool. 2: 432.

Mitsutani, M., Y. Ohnuki, Y.H. Наканиши и C.M. Померат. 1960. Развитието на почти диплоиден щам in vitro от индуциран от дим-кондензат миши тумор. Република Тексас Biol. Med. 18: 455-469.

Moretti, R.L. и K.B. DeOme. 1962. Ефект на инсулина върху усвояването на глюкоза от нормални и неопластични миши млечни тъкани в органна култура. J. Nat. Рак Инст. 29: 321-329.
Вижте също PubMed.

Morgan, J. F. 1958. Хранене на тъканната култура. Бактериол. Откр. 22: 20-45.
Вижте също PubMed.

Морган, J.F., L.F. Guerin и H.J. Morton. 1956. Ефектът от ниска температура и съхранение върху жизнеспособността и специфичността на щама на мишка на асцитни туморни клетки. Рак Res. 16: 907-912.
Вижте също PubMed.

Мъри, М. Р. 1959. Използване на тъканна култура при изследване на злокачественост, стр. 469-516. В F. Homburger [ред.] Патофизиологията на рака, 2-ро изд. Хобър-Харпър, Ню Йорк.

Мъри, M.R., и G. Kopech. 1953. Библиография на изследванията в тъканната култура, 1884-1950. Академик Прес, Ню Йорк. 2 том

Мъри, M.R., и G. Kopech. 1965. Текуща литература за тъканна култура. том 5 . Октомврийска къща, Ню Йорк.

Мъри, M.R., и G. Kopech. 1966. Текуща литература за тъканна култура. [1961-64]. томове 1-4 . Октомврийска къща, Ню Йорк.

Нов, D.A.T. 1962. Действие на витамин А върху кожата на гризачите и букалния епител в културата на органите, стр. 20. Анну. Rep. Strangeways Res. лаборатория, Кеймбридж, Англия.

New, D.A.T. и K.F. Стайн. 1963. Култивиране на миши ембриони in vitro. Природа 199: 297-299.
Вижте също PubMed.

Паркър, R.C. 1961. Методи на тъканната култура, 3-то изд. Хобър-Харпър, Ню Йорк. 358 стр.

Paul, J. 1958. Бележка за номенклатурата на клетъчните щамове. Вирусология 5: 175.

Paul, J. 1960. Влияния на околната среда върху метаболизма и състава на култивираните клетки. J. Exp. Zool. 142: 475-505.
Вижте също PubMed.

Paul, J. 1961. Клетъчна и тъканна култура, 2-ро изд. Ливингстън, Единбург и Лондон. 312 стр.

Пол, Дж. и М.Г. Струтери. 1963. Актиномицин D-резистентен синтез на РНК в животински клетки. Биохимия. Биофиз. Res. Комуникация. 11: 135-139.

Pearce, G.W. 1963. Тъканна култура при изследване на мускулната дистрофия, стр. 178-191. В G.H. Борн и М.Н. Golarz [ред.] Мускулна дистрофия при човек и животни. Хафнър, Ню Йорк.

Пиърсън, Н.П. 1962. Реакция на определени култури от туморни тъкани на мишка и хамстер с полиома вирус. Proc. Soc. Exp. биол. Med. 111: 332-334.
Вижте също PubMed.

Peppers, E.V., B.B. Westfall, H.A. Кер и Р. Р. Ърл. 1960. Забележка за каталазната активност на няколко щама на клетки от бозайници след продължително култивиране In vitor. J. Nat. Рак Инст. 25: 1065-1068.
Вижте също PubMed.

Филипс, H.J., и J.E. Terryberry. 1957. Преброяване на активно метаболизиращи тъканно култивирани клетки. Exp. Cell Res. 13: 341-347.
Вижте също PubMed.

Pinkel, D. 1963. Успешно култивиране на фрагменти от далак в културата на органите. Proc. Soc. Exp. биол. Med. 112: 242-245.

Prop, F.J.A. 1959. Органна култура на обща млечна жлеза на мишката. Nature 184: 379-380.
Вижте също PubMed.

Проп, F.J.A. 1960. Развитие на алвеоли в органни култури от общите млечни жлези на шестседмични девствени мишки. Exp. Cell Res. 20: 256-258.
Вижте също PubMed.

Prop, F.J.A. 1961. Чувствителност към пролактин на миши млечни жлези in vitro. Exp. Cell Res. 24: 629-631.
Вижте също PubMed.

Рейд, Т. Р. и М. П. Гифорд. 1952. Количествено изследване на ефектите на рентгеновото лъчение върху клетките in vitro. J. Nat. Рак Инст. 13: 431-439.
Вижте също PubMed.

Ривера, Е. М. 1963. Хормонални изисквания за оцеляване и растеж на миши първични млечни канали в органна култура. Proc. Soc. Exp. биол. Med. 114: 735-738.
Вижте също PubMed.

Ривера, Е.М., и Х.А. Берн. 1961. Влияние на инсулина върху поддържането и секреторната стимулация на тъканите на млечната жлеза на мишки от хормони в органна култура. Ендокринология 69: 340-353.
Вижте също PubMed.

Ривера, Е.М., Дж. Дж. Елиас, Х.А. Берн, Н.П. Напалков и Д. Пителка. 1963. Токсични ефекти на стероидните хормони върху културите на органи на миши тумори на млечната жлеза, с коментар за появата на органи на вирусно включване. J. Nat. Рак Инст. 31: 671-687.
Вижте също PubMed.

Руза, Р. А., и Л. А. Херценберг. 1959. Избор на варианти, устойчиви на антагонисти на фолиева киселина и 5-флуоруридин в клетъчни култури на лимфоцитна неоплазма. Proc. Амер. ас. Рак Res. 3: 58.

Rothfels, K.H., and R.C. Паркър. 1959. Кариотипите на клетъчните линии наскоро установени от нормални миши тъкани. J. Exp. Zool. 142: 507-520.
Вижте също PubMed.

Сакс, Л. и Д. Медина. 1961. In vitro трансформация на нормални клетки от полиома вирус. Nature 189: 457-460.
Вижте също PubMed.

Salzburger, B. 1962. Étude du développement de l'ovarie de souris greffé dans l'embryon depoulet après култура in vitro. арх. Анат. Микроскоп. Morphol. Exp. 51: 1-10.

Санфорд, К.К. 1958. Клонални изследвания върху нормални клетки и тяхната неопластична трансформация in vitro. Рак Res. 18: 747-752.
Вижте също PubMed.

Санфорд, К.К. 1962. Трансформации по отношение на злокачественото заболяване. Acta Cytol. 6: 400-401.

Санфорд, К. К., Х. Б. Андервонт, Г. Л. Хобс и В. Р. Ърл. 1961 г. а. Поддържане на туморния агент на млечната жлеза в дългосрочни култури на миши карцином на млечната жлеза. J. Nat. Рак Инст. 26: 1185-1191.
Вижте също PubMed.

Санфорд, К. К., А. Б. Ковалески, Л.Т. Дюпри и Р. Р. Ърл. 1961 г. б. Клониране на клетки от бозайници чрез опростена капилярна техника. Exp. Cell Res. 23: 361-372.
Вижте също PubMed.

Санфорд, К. К., Т. Б. Дън, A.B. Ковалески, Л.Т. Дюпри и Р. Р. Ърл. 1961 c. Полиома вирус и продуциране на злокачествено заболяване in vitro. J. Nat. Рак Инст. 26: 331-357.
Вижте също PubMed.

Санфорд, К. К., Т. Б. Dunn, B.B. Westfall, A.P. Covalesky, L.T. Дюпри и Р. Р. Ърл. 1961 г. Саркоматозна промяна и поддържане на диференциация в дългосрочни култури на миши карцином на млечната жлеза. J. Nat. Рак Инст. 26: 1139-1183.
Вижте също PubMed.

Санфорд, К. К., У. Р. Ърл и Г. Д. Вероятно. 1948. Растежът in vitro на единични изолирани тъканни клетки. J. Nat. Рак Инст. 9: 229-246.

Санфорд, К. К., У. Р. Ърл, Е. Шелтън, Е. И. Шилинг, Е. М. Дюшен, Г. Д. Вероятно и М. М. Бекер. 1950. Производство на злокачествено заболяване in vitro. XII. По -нататъшни трансформации на миши фибробласти в саркоматозни клетки. J. Nat. Рак Инст. 11: 351-375.
Вижте също PubMed.

Санфорд, К. К., Г. Л. Хобс и У. Р. Ърл. 1956. Капацитетът за производство на тумори на щам L миши клетки след 10 години in vitro. Рак Res. 15: 162-166.
Вижте също PubMed.

Sanford, K.K., G.D. Likely и W. R. Earle, 1954. Развитието на вариации в трансплантируемостта и морфологията в клонинг от миши фибробалсти, трансформирани в клетки, произвеждащи саркома in vitro. J. Nat. Рак Инст. 15: 215-237.
Вижте също PubMed.

Санфорд, К. К., Г. Д. Вероятно, В. Дж. Евънс, Си Джей Маки и У. Р. Ърл. 1952. Производство на саркоми от култивирани тъкани на хепатом, меланом и тумори на щитовидната жлеза. J. Nat. Рак Инст. 12: 1057-1077.
Вижте също PubMed.

Санфорд, К. К., Р. М. Мервин, Г. Л. Хобс, М. К. Фиорамонти и W.R. Ърл. 1958. Изследвания върху разликата в капацитета за производство на саркома на две линии миши клетки, получени in vitro от една клетка. J. Nat. Рак Инст. 20: 121-145.
Вижте също PubMed.

Санфорд, К. К., Р. М. Мервин, Г. Л. Хобс, Дж. М. Йънг и В. Р. Ърл. 1959. Клонален анализ на вариантни клетъчни линии, трансформирани в злокачествени клетки в тъканната култура. J. Nat. Рак Инст. 23: 1035-1059.
Вижте също PubMed.

Sanford, K.K., B.B. Westfall, E.H. Chu, E.L. Куф, А.Б. Ковалески, Л.Т. Дюпри, Г. Л. Хобс и В. Р. Ърл. 1961 г. д. Промени в морфологията, аргиназата и β-глюкуронидазата в клонинг на миши туморни клетки in vitro. J. Nat. Рак Инст. 26: 1193-1219.
Вижте също PubMed.

Сато, Г. и В. Буонасиси. 1961. Културата на диференцирани тумори. Abstr. 1 -ва среща Амер. Soc. Клетъчен биол. стр. 189.

Шиндлер, Р., М. Дей и Г.А. Фишър. 1959. Култура на неопластични мастоцити и техният синтез на 5-хидрокситриптамин и хистамин in vitro. Рак Res. 19: 47-51.
Вижте също PubMed.

Скот, D.B.M., A.M. Пакоски и К.К. Санфорд. 1960. Анализ на ензимната активност на клонинги, получени от вариантни клетъчни линии, трансформирани в злокачествени клетки в тъканната култура. J. Nat. Рак Инст. 25: 1365-1379.
Вижте също PubMed.

Моряк, A.R. 1956. Култивирането in vitro на простатната жлеза на възрастна мишка в алкална течна среда. Exp. Cell Res. 11: 283-288.
Вижте също PubMed.

Seaman, A.R., и S. Stahl. 1956. Поемането на I 131 от щитовидната жлеза на възрастна мишка след ин витро култивиране. Exp. Cell Res. 11: 220-221.
Вижте също PubMed.

Шелтън, Е. и W.R. Ърл. 1951. Производство на злокачествено заболяване in vitro. XIII. Поведение на възстановителните култури. J. Nat. Рак Инст. 11: 817-837.
Вижте също PubMed.

Шелтън, Е., В. Дж. Евънс и G.A. Паркър. 1963. Злокачествена трансформация на мишка съединителна тъкан, отгледана в дифузионни камери. J. Nat. Рак Инст. 30: 377-392.
Вижте също PubMed.

Sidman, R.L. 1956 a. Хистогенеза на кафява мастна тъкан in vivo и в органна култура. Анат. Rec. 124: 581-595.
Вижте също PubMed.

Сидман, RL 1956 b. Директният ефект на инсулина върху органичната култура на кафява мазнина. Анат. Rec. 124: 723-734.
Вижте също PubMed.

Sidman, R.L. 1961. Изследвания на тъканна култура на наследствена дистрофия на ретината. Дис. Нерв. Syst. (Monogr. Suppl.) 22 (4): 14-20.

Sidman, R. L. 1963. Анализ на органичната култура за наследствена дистрофия на ретината при гризачи. Нац. Рак Инст. Monogr. 11: 227-246.

Сидман, Р. Л., и П. Мотла. 1961. Клетъчно делене и миграция в културите на органи на мишката ретина. Excerpta Med. (Раздел I) 15: 558.

Sorieul, S. и B. Ephrussi. 1961. Кариологична демонстрация на хибридизация на клетки на бозайници in vitro. Nature 190: 653-654.

Стивънсън, Р.Е. [ред.] 1962. Аналитична клетъчна култура. Нац. Рак Инст. Monogr. 7. 290 стр.

Стюарт, окръг Колумбия, и П.Л. Кърк. 1954. Течната среда в тъканната култура. биол. Откр. 29: 119-153.

Плувай, Н.П. 1959. Микробиологични аспекти на тъканната култура. Анну. Rev. Microbiol. 13: 141-176.

Szab ó, G. 1954. Изследвания върху култивирането на зъби in vitro. J. Anat. 88: 31-44.
Вижте също PubMed.

Тарковски, А.К. 1959 г. а. Експерименти за развитието на изолирани бластомери на яйца от мишки. Nature 184: 1286-1287.
Вижте също PubMed.

Тарковски, А.К. 1959 г. б. Експериментални изследвания на регулацията при развитието на изолирани бластомери на миши яйца. Acta Theriol. 3: 191-267.

Тарковски, А.К. 1961. Мишките химери се развиват от слети яйца. Nature 190: 857-860.
Вижте също PubMed.

Тарковски, А.К. 1963. Проучвания върху миши химери, развити от яйца, слети in vitro. Нац. Рак Инст. Monogr. 11: 51-71.
Вижте също PubMed.

До 1961 г. а. Радиационни ефекти върху цикъла на делене на клетки на бозайници in vitro. Ан. Н.Ю. Акад. Sci. 95: 911-919.
Вижте също PubMed.

Тил, Дж. Е. 1961 г. б. Радиочувствителност и брой на хромозомите в миши клетки на щам L в тъканна култура. Радиат. Res. 15: 400-409.
Вижте също PubMed.

Todaro, G.J., and H. Green. 1963. Количествени изследвания на растежа на миши ембрионални клетки в културата и тяхното развитие в установени клетъчни линии. J. Cell Biol. 17: 299-313.
Вижте също PubMed.

Троуел, О.А. 1959. Културата на зрели органи в синтетична среда. Exp. Cell Res. 16: 118-147.
Вижте също PubMed.

Троуел, О.А. 1961 г. а. Цитоцидни ефекти на радиацията върху културите на органи. Ан. Н.Ю. Акад. Sci. 95: 849-865.
Вижте също PubMed.

Троуел, О.А. 1961 г. б. Проблеми в поддържането на зрели органи in vitro. Colloq. Int. Център Nat. Res. Sci. 101: 237-254.

Van de Kerckhove, D. 1958. L'ovaire p érinatal de la souris blanche en organotipique култура. Compt. Ренд. ас. Анат. 104: 754-759.

Vogt, М. и R. Dulbecco. 1960. Вирус-клетъчно взаимодействие с тумор-продуциращ вирус. Proc. Нац. Акад. Sci. 46: 365-370.
Вижте също PubMed.

Waymouth, C. 1954. Хранене на животински клетки. Int. Rev. Cytol. 3: 1-68.

Waymouth, C. 1960. Растеж в тъканната култура, p. 546-587. В W.W. Nowinski [ред.] Основни аспекти на нормалния и злокачествен растеж. Елзевиер, Амстердам.

Waymouth, C. 1965. Конструиране и използване на синтетични среди, стр. 99-142. В E.N. Willmer [ред.] Клетки и тъкани в културата, том. 1 Academic Press, Ню Йорк.

Уелс, Л. Дж. И Е. Боргезе. 1961. Sviluppo embrionale in vitro del pancreas di topo. Boll. Zool. 28: 235-239.

Уелс, Л. Дж. И Е. Боргезе. 1963. Развитие на панкреаса на ембриона на мишка in vitro: ацини и островчета. Генерал Comp. Ендокринол. 3: 265-273.
Вижте също PubMed.

Westfall, B.B. 1962. Характеризиране на клетките в тъканната култура. Нац. Рак Инст. Monogr. 7: 147-157.
Вижте също PubMed.

Westfall, B.B., E.V. Peppers, V.J. Евънс, К.К. Санфорд, Н. М. Хокинс, М.К. Фиорамонти, Х.А. Кер, Г. Л. Хобс и У. Р. Ърл. 1958. Аргиназната и родановата активност на някои клетъчни щамове след продължително култивиране in vitro. J. Biophys. Биохимия. Цитол. 4: 567-570.
Вижте също PubMed.

Уайт, P.R. [ред.] 1957. Сборник от десетгодишната прегледна конференция за тъканна култура. J. Nat. Рак Инст. 19: 467-843.

Уайт, P.R. 1963. Култивирането на животински и растителни клетки, 2-ро. изд. Роналд, Ню Йорк. 228 стр.

Whitfield, J. F. и R.H. Rixon. 1959. Ефекти на X радиация върху мултипликацията и синтеза на нуклеинови киселини в култури от миши клетки от щам L. Exp. Cell Res. 18: 126-137.
Вижте също PubMed.

Whitfield, J.F., R.H. Rixon и T. Youdale. 1961. Ефекти на ултравиолетовата светлина върху размножаването и синтеза на дезоксирибонуклеинова киселина в култури на миши клетки от L щам. Exp. Cell Res. 22: 450-454.
Вижте също PubMed.

Whitfield, J.F., R.H. Rixon и T. Youdale. 1962. Предотвратяване на митотичен разпад в облъчени суспензионни култури от L миши клетки от агматин. Exp. Cell Res. 27: 143-147.
Вижте също PubMed.

Whitmore, G.F., J.E. Till, R.B.L. Gwatkin, L. Siminovitch и A.F. Graham. 1958. Увеличаване на клетъчните съставки в X-облъчени клетки на бозайници. Биохимия. Биофиз. Acta 30: 583-590.
Вижте също PubMed.

Whitten, W.K. 1956. Култура на тръбни миши яйцеклетки. Природа 177: 96.
Вижте също PubMed.

Whitten, W.K. 1957. Ефектът на прогестерона върху развитието на миши яйца in vitro. J. Ендокринол. 16: 80-85.
Вижте също PubMed.

Уилмър, Е.Н. 1960 г. а. Тъкани в културата и в тялото. Symp. Soc. Exp. биол. 14: 28-40.
Вижте също PubMed.

Уилмър, Е.Н. 1960 б. Цитология и еволюция. Академик Прес, Ню Йорк. 430 стр.

Wolff, E. 1952. Sur la différenciation sexuelle des gonades de souris explantées in vitro. Compt. Ренд. Акад. Sci. 234: 1712-1714.
Вижте също PubMed.


Как мога да направя базово редактиране в моята лаборатория?

Ето стъпка по стъпка работен процес, който можете да използвате за извършване на редактиране на база в клетки на бозайници чрез методи на доставка на базата на плазмид:

  1. Проектирайте sgRNA с уеб инструмента, който разработихме с Benchling, който включва тези правила.
  2. Поръчайте олиго и клонирайте своя sgRNA експресионен плазмид.
  3. Подгответе плазмиди с качество на трансфекция за вашия sgRNA плазмид и основен редактор по ваш избор.   Препоръчваме BE3 за повечето приложения. Ако ниски количества образуване на индел не са приемливи, тогава препоръчваме да използвате BE2. Плазмидите могат да бъдат получени от Addgene.
  4. Трансфектирайте или нуклеофектирайте вашите интересни клетки с sgRNA и BE плазмиди. Като цяло е установено, че съотношение 1: 3 на sgRNA плазмид: BE плазмид (тегловно) дава най -добри резултати.
  5. След 3 дни съберете трансфектирани клетки и определете количествено ефективността на редактирането на базата си с помощта на HTS.

За пълно обяснение как определяме тези правила, моля, вижте пълния ни ръкопис в Nature.


Гледай видеото: Кукувица (Декември 2022).